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http://repositorio.ufc.br/handle/riufc/73625| Tipo: | Tese |
| Título : | Isolamento e caracterização biológica de lectina de sementes e dos calos induzidos a partir de cotilédones e hipocótilos de Glycine wightii |
| Autor : | Silva, Fabia Maria Barroso da |
| Tutor: | Horta, Ana Cecília Goes |
| Co-asesor: | Medeiros, Maria Angelina da Silva |
| Palabras clave : | Proteínas;Lectinas de plantas;Leguminosa |
| Fecha de publicación : | 2006 |
| Citación : | SILVA, Fabia Maria Barroso da. Isolamento e caracterização biológica de lectina de sementes e dos calos induzidos a partir de cotilédones e hipocótilos de Glycine wightii. 2006. Tese (doutorado em Bioquímica) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2006. |
| Resumen en portugués brasileño: | A maioria das lectinas já isoladas e caracterizadas são de sementes de Legrnlinosae, principalmente das sub-famílias Papilionoideae. No presente trabalho foram investigadas propriedades fisico-químicas e biológicas da lectina galactose-ligante de sementes de Glycine wightii (LGw). Esta lectina isolada por cromatografia de afinidade em coluna de goma de guar, e eluída com tampão Glicina-HC1 pH 2,6 em solução de NaCl 0,15 M. Duas frações (P1 e P2) foram obtidas. Foi observado que o P1 não apresentou atividade hemaglutinante e P2 aglutinou hemáceas humanas tripsinizadas (suspensão a 4%) do grupo Al sem necessitar da adição de íons metálicos. Ensaios de eletroforese em gel de poliacrilamida revelaram a presença de uma banda protéica cuja massa molecular aparente foi de 45 KDa. A lectina perdeu cerca de 87% de sua atividade biológica quando foi aquecida a 40 °C por 5 minutos e após 15 minutos foi totalmente inativada e ao ser aquecida a 50 °C por 5 minutos apenas 25% da atividade hemaglutinante permaneceu, sendo totalmente inativa após esse tempo. A determinação de açucares por Dubois, usando como padrão a D-glucose, revelou que essa lectina é uma glicoproteína cujo teor é de 1,49%. As estruturas secundárias foram avaliadas por dicroísmo circular e revelaram uma predominância de o-folha. Ensaios de focalização isoelétrica revelaram uma variação de pH entre 6,35 e 7,0 sugerindo a existência de isoformas. O extrato total das sementes de Glycine wightii e a LGw ao ser injetados por via intraperitoneal em camundongos não provocou a morte de nenhum animal. Pode-se observar que o extrato total foi capaz de induzir, parcialmente, a migração de leucócitos em ratos, sendo os neutrófilos polimorfonucleares as células predominantes (aproximadamente 70 %) nesse processo que migraram e acumularam-se no sítio inflamatório em níveis próximos aos da carragenina. Pelos resultados obtidos observou-se que os moduladores utilizados, talidomida e pentoxifilina, foram capazes de inibir, a níveis inferiores que aos observados para o controle negativo, a migração de leucócitos para a cavidade peritoneal de ratos e que ocorreu uma inibição em mais de 80% da indução na migração das células totais quando a LGw foi injetada com a D-galactose. A LGw induziu edema de pata em ratos Wistar com pico máximo entre 2 e 3 horas após a injeção subplantar. Os calos obtidos a partir de cotilédones e de hipocótilos foram caracterizados com relação ao teor de umidade (7,98% e 7,4%, respectivamente), cinzas (0,64% e 0,47%, respectivamente), carboidratos (7,98% e 7,4%, respectivamente). Nenhum pico ficou retido em coluna de goma de guar ao ser realizada a cromatografia de afinidade dos extratos obtidos a partir de calos de cotilédones e de hipocótilos e nenhuma atividade hemaglutinante foi observada. Ao ser realizado ensaios imunológicos por ELISA identificou-se a presença de pequena quantidade (7,0%) da LGw apenas nos extratos obtidos a partir de calos cotiledonares. Ambos os extratos foram capazes de induzir, fracamente, a migração de células totais para a cavidade peritoneal de ratos. Os extratos obtidos a partir de calos cotiledonares e de hipocótilos de sementes de Glycine wightii não matou nenhum camundongo exposto. |
| Abstract: | Most of the already characterized lectins were isolated from Leguniinosae (mainly Papilionoideac) seeds. In this thcSiS, the ply Sicv-eli euita1 and biological properties of a D-galactose-binding lectin, from Glycine wightii (Leguminosae Papilionoideae) seeds, is described. The lectin was isolated by affinity chromatography on guar gum matrix, in NaC1 0.15 M. After the elution of the non-retained fraction (F1), the retained fraction (F2) was 21uwu t,.+~a vvitii +t, n v. iì lvl, tt r u~ N1i r.v ~ ~ ~t_, ; iy t uiG-11\ 1 vuiicl ~rr~t 1.---(1D-,, C3iitauiiii~ v. +~;~: ~ n tic TT ~T ni n t lvl 1\Q.t+1. viuy, 4Lilt, L.rt ~ llcit.=tiVi1 ~~+:,. Fl showed hemagglutinating activity. This activity was more evident with trypsin treated group Al human erythrocytes. No divalent cations were needed. By PAGE-SDS only a single band, with Mr of 45 1-r‘a, was found. The lectin was showed to be thereto labile, loosing all the hemagglutinating activity when heated to 40°C by 15 min. The lectin is a glycoprotein (1.49 %). The lectin secondary structure was evaluated by circular dicroism and showed a predominance of beta-sheet. By isoelectric focusing several bands were found between pl from 6.35 to 7.0, indicating the presence of isoforms. When the purified lectin and the crude extract were intraperitoneally administered to mouse, no toxicity was found. The Ciúde extract induced the ls,i.u-oc-yre immigration lii rats, and the polymorphonuclear neutrophils were predominant (70%), with levels similar to carragenana. Modulators like talidomida and pentoxilfilin inhibited the leukocyte immigration in lower levels than the observed for the negative control, while 80% of inhibition occurred when the lectin was administered in the presence of D-galactose. The lectin induced rat paw edema in Wistar rats with a peak between 2 an 3 h after the injection. Calluses were developed from cotyledons and hypocotyls, obtained from Glycine wightii germinating seeds. They were characterized with respect to the water content (7.9 % and 7.4 %, respectively), ash (0.64 % and 0.47 %, respectively), and carbohydrate (7.98 and 7.4 respectively). No retained fraction was retained, when the callus crude extracts were submitted to affinity chromatography on the guar gum matrix, but a small amount of the lectin was detected by Elisa in the cotyledonary calluses. Both the callus extracts induced, although weakly, the cell immigration to the rat peritoneal cavity, but no death was observed when theses extract were intraperitoneally administered to mice. |
| Descripción : | Este documento está disponível online com base na Portaria nº 348, de 08 de dezembro de 2022, disponível em: https://biblioteca.ufc.br/wp-content/uploads/2022/12/portaria348-2022.pdf, que autoriza a digitalização e a disponibilização no Repositório Institucional (RI) da coleção retrospectiva de TCC, dissertações e teses da UFC, sem o termo de anuência prévia dos autores. Em caso de trabalhos com pedidos de patente e/ou de embargo, cabe, exclusivamente, ao autor(a) solicitar a restrição de acesso ou retirada de seu trabalho do RI, mediante apresentação de documento comprobatório à Direção do Sistema de Bibliotecas. |
| URI : | http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/73625 |
| Aparece en las colecciones: | DBBM - Teses defendidas na UFC |
Ficheros en este ítem:
| Fichero | Descripción | Tamaño | Formato | |
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