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Type: Tese
Title: Atividade biológica, purificação e caracterização da lectina e toxina da alga marinha vermelha Gracilaria cornea J. Agardh
Authors: Lima, Maria Edna Pereira
Advisor: Benevides, Norma Maria Barros
Keywords: Alga
Issue Date: 2003
Citation: LIMA, Maria Edna Pereira. Atividade biológica, purificação e caracterização da lectina e toxina da alga marinha vermelha Gracilaria cornea J. Agardh. 2003. Tese (Doutorado em Bioquímica) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2003.
Abstract in Brazilian Portuguese: A alga marinha vermelha Gracilaria cornea foi analisada quanto á sua composição química, apresentando, elevados teores de carboidratos, magnésio e fósforo. O extrato bruto da alga aglutinou preferencialmente eritrácitos de galinha tratados com tripsina e mostrou-se tóxico para camundongos dentro de um periodo de 24 horas por injeção intraperitoneal (DL50 104mg/kg de peso corpóreo do animal). O tratamento térmico do extrato bruto aboliu completamente a atividade hemaglutinante a 50°C por 5 minutos e a atividade tóxica a 60°C por 5 minutos. O procedimento de purificação da toxina e da lectina foi conduzido por aplicação do extrato bruto em cromatografia de interação hidrofóbica em coluna de Sepharose CL-4B seguido por cromatografia de filtração em gel de Sephadex G-100. A toxina em estudo é uma glicoproteína que apresenta 36,8% de carboidratos na sua estrutura, sendo considerada uma proteina dimérica com massa molecular aparente de 71,56 kDa por filtração em gel de Sephadex G-100 e apresentando uma banda de massa molecular de 35,0 kDa sob condições desnaturantes por PAGE-SDS em presença de J3-mercaptoetanol. A lectina também é uma glicoproteina apresentando 52,30% de carboidratos, sendo considerada uma proteína monomérica com massa molecular aparente de 56,4Kda por filtração em gel de Sephadex G-100 e 66,0 kDa em condições desnaturantes em presença de j3-mercaptoetanol. A toxina é ativa para camundongos (DL50 5,18mg/kg de peso corpóreo do animal) produzindo convulsões tônico-clônicas e paralisia facial que antecedem a morte do animal. As avaliações preliminares de atividade tóxica do extrato total , da toxina e lectina sobre o ciclo de vida do carrapato bovino B. microplus demonstraram que estas frações protéicas afetaram algumas fases do ciclo de vida desse ectoparasita, sendo mais acentuados os efeitos tóxicos produzidos pelo extrato bruto e lectina.
Abstract: The red marine alga Gracilaria cornea was analyzed in related to its chemical composition, showing predominance in the carbohydrate, magnesium and phosphorus. The crude extract of the alga agglutinated preferentially chicken erythrocytes treated with tripsin and it showed to be toxic to mice within 24 hours upon intraperitoneal injection (LD 50 104.0 mg/kg body weight). Thermal treatment of the crude extract to 50°C for 5 minutes completely inactived the haemagglutinating activity and to 60°C for 5 minutes the toxic activity. The purification procedure of the toxin and of the lectin was realized by application of the crude extract in hydrophobic interaction chromatography on column of PhenylSepharose CL-4B followed by gel filtration on Sephadex G-100 colunm. The carbohydrate content of 36.8% suggests that the toxin is a glycoprotein. It showed an molecular mass 71.56 kDa by gel filtration on Sephadex G-100 colunm and an molecular mass of 35 kDa by SDS-PAGE in the presence of b-mercaptoetanol. The lectin exhibited a single proteic band with apparent molecular mass of 56.4 kDa and under desnaturant conditions (SDS-PAGE in the presence de bmercaptoetanol) also exhibited a single proteic band with molecular mass of 66.0 kDa. Its carbohydrate content of 52.30% suggests that this protein is also a glycoprotein. The toxin is active for mice (LD 50 5.18mg/kg body weight) producing dyspnea, tonic-clônics convulsions and flaccid paralysis prior to death of the animal. The preliminary evaluations of the crude extract, lectin and toxin in the control on the tick B. micropius demonstrated that these proteics fractions affected the evolutionary cycle of the ectoparasite. The toxic effects of the crude extract and lectin were shown to be more intense than those of the toxin.
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URI: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/72444
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