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Tipo: Dissertação
Título: Potencial imunológico e expressão gênica de lectinas em camarões Penaeus vannamei cultivados em águas oligohalinas e desafiados com o Vírus da Mionecrose Infecciosa (IMNV)
Autor(es): Viana, Jhonatas Teixeira
Orientador: Maggioni, Rodrigo
Coorientador: Rocha, Rafael dos Santos
Palavras-chave: Carcinicultura;Imunidade inata;Virose;Imunorregulação
Data do documento: 2023
Citação: VIANA, Jhonatas Teixeira. Potencial imunológico e expressão gênica de lectinas em camarões Penaeus vannamei cultivados em águas oligohalinas e desafiados com o Vírus da Mionecrose Infecciosa (IMNV). 2023. 78 f. Dissertação (Mestrado em Engenharia de Pesca) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2023.
Resumo: A carcinicultura é um dos setores da aquicultura que mais tem crescido nos últimos anos, com notável destaque para a espécie Penaeus vannamei. Contudo, o cultivo de camarões é ameaçado por doenças das mais diversas origens, incluindo as virais, como é o caso da mionecrose infecciosa (IMN), que afeta a carcinicultura brasileira desde o início dos anos 2000. Muitos pesquisadores, observando as necessidades do setor, propõem estudos sobre a imunologia dos animais, a fim de compreender melhor os mecanismos de resposta do organismo frente a situações de estresse imunológico. Nesse contexto, podemos destacar as lectinas, proteínas com afinidade por carboidratos e glicoproteínas. Devido suas características estruturais, as lectinas são capazes de reconhecer patógenos específicos por meio da interação com padrões moleculares, atuando em diferentes vias de reconhecimento e sinalização para a eliminação de microrganismos. O presente trabalho se propôs, primordialmente, a avaliar a expressão gênica diferencial de cinco lectinas imunológicas (LvLdlrCTL, LvCTL4, LvCTL5, LvAV e LvCTLU) em camarões P. vannamei infectados experimentalmente com o vírus da mionecrose infecciosa (IMNV), a fim de entender melhor o funcionamento do sistema imune dos camarões e o papel das lectinas nesse processo. O experimento desenvolvido avaliou a expressão diferencial entre camarões infectados e não infectados por IMNV (50 μL, 104 cópias de IMNV/μL), utilizando amostras do hepatopâncreas, brânquias, intestino e hemolinfa. Os animais foram coletados em intervalos de 0, 4, 8, 12, 24, 48, 72 e 96 horas pós injeção (hpi), a fim de avaliar a expressão ao longo do tempo em diferentes tecidos, usando os genes β-actina e EF-1α como normalizadores. Aliados a isto, foram empregadas técnicas bioinformáticas para caracterizar e elucidar prováveis aspectos estruturais e bioquímicos relacionados às atividades imunológicas; e a contagem total de hemócitos, para relacionar a ação das lectinas com possíveis efeitos celulares. Foi observado que cada lectina apresenta um perfil único de expressão, sendo também diferente para cada tecido analisado. Hepatopâncreas e brânquias foram considerados os melhores tecidos para avaliar a expressão diferencial de lectinas imunológicas, sendo LvLdlrCTL e LvCTL5 as lectinas com os resultados mais significativos. A LvLdlrCTL teve sua expressão regulada positivamente em torno de 28 vezes, o que, de acordo com seus aspectos estruturais, deve-se possivelmente a presença de um domínio receptor de lipoproteínas de baixa densidade e a abundância de modificações pós-traducionais envolvidas nesse processo. Já LvCTL5 apresentou sobreposição de picos de expressão junto a maioria das demais lectinas analisadas, bem como na contagem total de hemócitos em camarões infectados, levando a crer que a mesma possui ação recrutadora de hemócitos e atividade imunorreguladora em cascatas imunológicas. Dito isso, concluímos que as lectinas imunológicas do P. vannamei atuam durante infecções pelo IMNV, principalmente LvLdlrCTL e LvCTL5, tendo sua expressão regulada especialmente no hepatopâncreas e nas brânquias. Os dados sugerem ainda que essas lectinas atuam em vias de imunorregulação e recrutamento de hemócitos; e que, provavelmente, os aspectos estruturais da LvLdlrCTL favorecem sua ação imunológica.
Abstract: Shrimp farming is one of the sectors of aquaculture that has grown the most in recent years, with notable focus on the species Penaeus vannamei. However, shrimp farming is impacted by diseases of the most diverse etiologies, including viral pathogens, as is the case of infectious myonecrosis (IMN), which has affected Brazilian shrimp farming since the early 2000s. Many researchers, observing the needs of shrimp farming, propose studies on the immunology of animals, in order to better undestand the mechanisms of the organism’s response to situations of immunological stress. In this context, we can highlight lectins, proteins with affinity for carbohydrates and glycoproteins. Due to their structural characteristics, lectins are capable of recognizing specific pathogens through interaction with molecular patterns, acting in different recognition and signaling pathways for the elimination of microorganisms. The present work aimed, primarly, to evaluate the differential gene expression of five immunological lectins (LvLdlrCTL, LvCTL4, LvCTL5, LvAV and LvCTLU) in P. vannamei shrimp experimentally infected with the infectious myonecrosis virus (IMNV), in order to understand the functioning of the shrimp’s immune system and the role of lectins in this process. The developed experiment evaluated the differential expression between shrimp infected and not infected by IMNV (50 µL, 104 copies of IMNV/µL), using samples from the hepatopancreas, gills, intestine and hemolymph. The animals were sampled at intervals of 0, 4, 8, 12, 24, 48, 72 and 96 hours post injection (hpi), in order to evaluate the differential expression along time in different tissues, using the β-actin and EF-1α genes as normalizers. Added to this, we employed bioinformatics analysis to characterize and elucidate probable structural and biochemical aspects related to immunological activities; and the total hemocytes count, to relate the action of lectins with possible cellular effects. It was observed that each lectin has a unique expression profile, which is also different for each analyzed tissue. Hepatopancreas and gills were considered the best tissues to evaluate the differential expression of immunological lectins, with LvLdlrCTL and LvCTL5 being the lectins with the most significatn results. LvLdlrCTL had its expression upregulated around 28 times and possibly the presence of low-density lipoprotein receptor domain and the abundance of post-translational modifications are involved in this process. LvCTL5, on the other hand, showed overlapping expression peaks with most of the other lectins analyzed, as well as in the belief that it has hemocytes recruiting action and immunoregulatory activity in immunological cascades. To, we conclude that the immunological lectins in P. vannamei act during IMNV infections, mainly LvLdlrCTL and LvCTL5, having their expression. regulated especially in the hepatopancreas and gills. The results also suggest that these lectins act in immunoregulation and hemocytes recruitment pathways; and, probably, the structural aspects of LvLdlrCTL favor its immunological action.
URI: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/73246
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