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http://repositorio.ufc.br/handle/riufc/59869| Tipo: | Dissertação |
| Título : | Purificação, caracterização bioquímica e estrutura primária parcial de uma lectina da esponja marinha Aplysina cauliformis |
| Título en inglés: | Purification, characterization and partial primary structure of a marine sponge lectin Aplysina cauliformis |
| Autor : | Viana, Lucas Alecrim Amorim |
| Tutor: | Sampaio, Alexandre Holanda |
| Co-asesor: | Carneiro, Rômulo Farias |
| Palabras clave : | Lectinas;Esponja marinha;Aplysina cauliformis |
| Fecha de publicación : | 2021 |
| Citación : | VIANA, Lucas Alecrim Amorim. Purificação, caracterização bioquímica e estrutura primária parcial de uma lectina da esponja marinha Aplysina cauliformis. 2021. 49 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia de Recursos Naturais) - Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2021. |
| Resumen en portugués brasileño: | Desde os primeiros relatos de aglutinação de eritrócitos no final do século XIX, diversos estudos sobre lectinas têm sido realizados. Atualmente, lectinas são consideradas proteínas ou glicoproteínas, não imunoglobulinas, que reconhecem carboidratos sem participar do metabolismo dos ligantes. As funções dessas proteínas são amplas, atuando principalmente no sistema imune inato em animais. As lectinas de animais podem ser classificadas em diversas famílias de acordo com suas características estruturais. Em esponjas, já foram relatadas lectinas pertencentes a três famílias, lectinas do tipo-C, galectinas e tachylectinas, sendo que a grande maioria das lectinas isoladas de esponjas carece de informações estruturais para classificá-las em algum grupo. Entre as lectinas que não pertencem a uma família estão aquelas extraídas das esponjas Aplysina fulva e A. lactuca. Essas lectinas demonstram potencial biotecnológico devido a atividade antibiofilme contras certas cepas bacterianas. Com isso, o objetivo do trabalho é extrair, purificar, caracterizar, e verificar a atividade biológica de uma lectina de Aplysina cauliformis. A combinações de técnicas cromatográficas de afinidade, troca-iônica e exclusão molecular se mostrou eficiente na purificação de ACL. A nova lectina mostrou ter uma alta especificidade por certas glicoproteínas, em especial a mucina de estômago de porco. A atividade hemaglutinante foi estável até 80 °C, e entre valores de pH 9 e 10, não sendo necessária a presença de cátions divalentes para observá-la. Em eletroforese em gel de SDS-PAGE, ACL apresentou uma banda de aproximadamente 66 kDa em condições não redutoras e duas bandas de aproximadamente 35 kDa em condições redutoras. Por cromatografia de exclusão molecular foi possível detectar e separar duas lectinas, ACL-1 e ACL-2 com massas nativas de 145 kDa e 120 kDa, respectivamente. ACL foi submetida a digestão proteica e os peptídeos gerados foram analisados por espectrometria de massas. Entretanto, estes peptídeos não apresentaram similaridade com qualquer proteína conhecida. Além disso, ACL foi capaz de aglutinar bactérias E. coli. |
| Abstract: | Since the first reports of erythrocyte agglutination in the late nineteenth century, several studies on lectins have been carried out. Currently, lectins are considered proteins or glycoproteins, not immunoglobulins, which recognize carbohydrates without participating in the metabolism of ligands. The functions of these proteins are broad, acting mainly on the innate immune system in animals. Animal lectins can be classified into several families according to their structural characteristics. In sponges, lectins belonging to three families, C-type lectins, galectins and tachylectins have already been reported, and the vast majority of lectins isolated from sponges lack structural information to classify them in some group. Among the lectins that do not belong to a family are those extracted from the sponges Aplysina fulva and A. lactuca. These lectins demonstrate biotechnological potential due to antibiofilm activity against certain bacterial strains. Thus, the objective of the work is to extract, purify, characterize, and verify the biological activity of a lectin from Aplysina cauliformis. The combination of chromatographic techniques of affinity, ion exchange and molecular exclusion proved to be efficient in the purification of ACL. The new lectin has been shown to have a high specificity for certain glycoproteins, in particular porcine stomach mucin. The hemagglutinating activity was stable up to 80 °C, and between pH 9 and 10, the presence of divalent cations not being necessary to observe it. In the electrophoresis gel, ACL showed a band of approximately 66 kDa under nonreducing conditions and two bands of approximately 35 kDa under reducing conditions. By molecular exclusion chromatography it was possible to detect and separate two lectins, ACL-1 and ACL-2 with native masses of 145 kDa and 120 kDa, respectively. ACL was subjected to protein digestion and the generated peptides were analyzed by mass spectrometry. However, these peptides showed no similarity to any known protein. Furthermore, ACL was able to agglutinate E. coli bacteria. |
| URI : | http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/59869 |
| Aparece en las colecciones: | PPGBRN - Dissertações defendidas na UFC |
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