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Tipo: TCC
Título : Estudo da composição e das atividades biológicas dos microrganismos isolados do ninho de espuma do anuro Adenomera hylaedactyla
Autor : Martins, Daniel Vieira
Tutor: Hissa, Denise Cavalcante
Co-asesor: Melo, Vânia Maria Maciel
Palabras clave : Anfíbios;Antifúngico;Enzimas;Microbiota
Fecha de publicación : 2020
Citación : MARTINS, Daniel Vieira. Estudo da composição e das atividades biológicas dos microrganismos isolados do ninho de espuma do anuro Adenomera hylaedactyla. 2020. 56 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Ciências Biológicas) – Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2020.
Resumen en portugués brasileño: Muitos grupos de anfíbios depositam seus ovos em n inhos de espuma. Essas est ruturas s ão formadas dur a n te o amplexo e resistem a degradação devida sua composição rica em proteínas surfac tantes, carboidratos e lectinas. Ninhos de espuma conferem abrigo a os ovos depositados e larvas jovens, proteção contra r aios ultravioletas, efeito s de dess ecação, predado r e s, além de fornecer oxigenação e reserva alimentar. Sabe se, atualmente, que a defe sa contra muitos patógenos no indivíduo adulto é proveniente de sua microbiota, entretanto pouco se conhece sobre a micr o biota presente nos ninhos durante s eu estágio juve n i l. O presente trabalho buscou isolar e identificar bactérias cultiváveis do ninho d e espuma do anuro Adenomera hylaedactyla , a fim de avaliar a import ância ecológica desses microrganismos e suas atividad e s biológicas, bem como seu potencia l biotecnológic o Os ninhos foram coletados em São Gonçalo do Amarante CE durante a estação chuvosa, junto de amostras do solo adjacente. Em seguida, as amostras fora m diluídas plaqueadas em meio ATGE ou BDA e mantidas por 48 /16 8 h a 30ºC. Os mor fotipos b acterianos e fú n g icos foram isolados e estocados. Foram realizados testes enzimáticos em me ios ATGE + amido (0,1% p/v) para amilases, ATGE + leite desnatado (1% p /v) e ATGE gelatina (3% p /v) para pes q uisa de protease s com diferentes sít ios de cl ivagem F oi adicionado l u g ol p ara detecção da atividade amil á si ca e uma sol ução de sulf ato de amônio ( ((NH4)2SO4) 4 1M para a atividade da gelatinase Para o ensaio antifúngico foi inoculado o fungo Fusarium sp em meio BDA e no quinto dia as bactérias e controle negativo E. col i (ATCC foram t ransferidas em fase log para a placa Os resultados foram observados pel a inibição do crescimento do fungo na placa . Para o teste antib a cteriano , foi realizado o antibiograma com amostras padronizadas do sobren adante do s cultivos de b actérias do ninho, utilizando as bactéria s Escherichia coli (ATCC 25922) e Bacillus subtilis (ATCC 6633) como cepa s alvo . O DNA genômico dos i solados de ninho foi extraído por term o lise ou CTAB 2X e o gene 16S r RNA amplificado utili zando os primers 27F e 1 525R ou 63F e 1389R e enviados para sequenc iamento. As sequencias foram tratadas utilizando o software Geneious Prim e e os gêneros identificados a partir do al i nhamento com o banco de dados. Foram isolados 17 fungos e 21 bactérias d o solo ad jacente, além d e 7 fungos e 30 bactérias nas amostras de n inho . Os isolados bacterianos do ninho de espuma foram predominantemente G ram negativas do filo Proteobacteria , e houve maior abundância dos gêneros Enterobact e r, Bacillus e Serratia . 8 (27 %) d os is olados do nin h o de espuma foram positivos para amilases e 19 (63%) positivos para proteases com difere ntes sítios de clivagem, em comparação com o solo adjacente que apresento u 5 (24%) para amilases e 8 (38%) para prot e ases . 9 (30%) dos isolados d o ninho a presentaram a t i vidade antifúngica no crescimento do fungo Fusarium sp. Nenhuma atividade antibacterian a significativa foi relatada O presente trabalho forneceu informações sobre os microrganismos cultiváveis do ninho de espuma da espécie A. hylae dactyla , destacando su a importância na defesa contra patógenos e potencial biotecnológico para produção de enzimas hidrolíticas.
Abstract: Many groups of amphibians lay their eggs in foam nests. Th ese struc tures are for m e d during amplexing and resist degradation due to their composition rich in surfactant proteins, carbohydrates and lectins. Foam nests provide shelter for deposited eggs and young larvae, protection against ultraviolet rays, desiccat ion effec ts, predators in addition to providing oxygen and food reserve. Currently is known that the defense against many pathogens in the adult individual comes from their microbiota. However, little is known about the microbiota present in the nests dur ing their juvenile sta g e . This work search to isolate and identify cultivable bacteria from the foam nest of the anuran Adenomera hylaedactyla , in order to evaluate the ecological importance of these microorganisms and their biological activities, as well as their biotechnologi c a l potential. The nests were collected in São Gonçalo do Amarante CE during the rainy season, in additional samples of the adjacent soil. Then, the samples were diluted and plated in ATGE and BDA medium and maintened for 48/168 h at 30ºC. The bacterial an d fungal morphotypes were isolated and stored. Enzymatic tests were carried out on ATGE + starch (0.1% w v) for amylases, ATGE + skimmed milk (1% w v) and ATGE + gelatin (3% w v) to search for proteases with different cleavage sites. Lugol was added t o det e c t amylase activity and a 4.1M ammonium sulfate ((NH4) 2SO4) solution for gelatinase activity. For the antifungal assay, the fungus Fusarium sp was grown in BDA medium and on the fifth day the bacteria and negative control E. coli ATCC 2592 2) were t rans f e rred in a log phase to the plate. The results were observed by inhibiting the growth of the fungus on the plate. For antibacterial tests, the antibiogram was performed with standardized samples of the supernatant from the bacterial cultures of the ne st, u s ing the bacteria Escherichia coli (ATCC 25922) and Bacillus subtilis (ATCC 6633) as target. The genomic DNA of the nest isolates was extracted by thermolysis or CTAB 2X and the 16S rRNA gene was amplified using primers 27F and 1525R or 63F a nd 1389R and s e nt for sequencing. The sequences were treated using the Geneious Prime software and the genera identified from the alignment with the database. 17 fungi and 21 bacteria were isolated from the adjacent soil, in addition to 7 fungi an d 30 bact eria in t he n e s t samples. The bacterial isolates of the foam nest were predominantly Gram negative from the Proteobacteria phylum, and there was a greater abundance of the Enterobacter , Bacillus and Serratia genera. 8 (27%) of foam nest isolates w ere posit ive for a myla s e s and 19 (63%) positive for proteases with different cleavage sites, compared to the adjacent soil that presented 5 (24%) for amylases and 8 (38%) for proteases. 9 (30%) of the nest isolates showed antifungal activity on the growth of the fu ngus Fusa rium s p . No significant antibacterial activity has been reported. The present work provided information on the cultivable microorganisms of the foam nest of the species A. hylaedactyla , highlighting its importance in the defense against p athogens and biote chno l o gical potential for the production of hydrolytic enzymes.
URI : http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/59436
Aparece en las colecciones: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS - BACHARELADO - Monografias

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