Uso de peptidases para produção de hidrolisado hipoalergênico do leite bovino

Oliveira, João Pedro Brasil de

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Type:	Dissertação
Title:	Uso de peptidases para produção de hidrolisado hipoalergênico do leite bovino
Title in English:	The use of peptidases in the production of hypoallergenic hydrolysates of bovine milk
Authors:	Oliveira, João Pedro Brasil de
Advisor:	Freitas, Cleverson Diniz Teixeira de
Keywords:	Monarca;Látex;Alergia;Leite
Issue Date:	2018
Citation:	OLIVEIRA, João Pedro Brasil de. Uso de peptidases para produção de hidrolisado hipoalergênico do leite bovino.2018. 91f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2018.
Abstract in Brazilian Portuguese:	A alergia ao leite bovino é um problema de saúde global que afeta principalmente os lactentes. Embora a maioria desses casos sejam transitórios, estes devem ser tratados para evitar problemas no desenvolvimento da criança. Assim, as fórmulas hidrolisadas se destacam por ser a alternativa mais viável para substituir o consumo do leite bovino. Nesse contexto, este estudo teve como objetivo estudar peptidases de origem vegetal (plantas laticíferas) e animal (intestino de insetos) com habilidade de hidrolisar as proteínas do leite bovino visando a produção de hidrolisados hipoalergênicos. A hidrólise das proteínas do leite foi realizada variando os seguintes parâmetros: proporção enzima:substrato, pH e tempo de incubação. Em seguida, os hidrolisados foram caracterizados de acordo com o grau de hidrólise e a antigenicidade residual foi determinada. As peptidases serínicas purificadas do intestino médio de Danaus plexippus (DpGp) foram capazes de hidrolisar as caseínas na proporção 1:25 (enzima:substrato), após 4 horas de incubação a pH 9,0. Utilizando os mesmos parâmetros, a hidrólise das proteínas do lactosoro só foi observada após 24 horas de incubação. Contudo, a hidrólise do lactosoro pré-aquecido (85 °C por 30 min) resultou em uma diminuição no tempo de reação e redução da antigenicidade. Os ensaios imunoenzimáticos mostraram que o leite hidrolisado por DpGp apresentou antigenicidade residual semelhante às formulas parcialmente hidrolisadas vendidas comercialmente. Em relação as plantas laticíferas, somente as peptidases do látex de Calotropis procera (CpLP), Cryptostegia grandiflora (CgLP) e Carica papaya (CapLP) foram capazes de hidrolisar as caseínas na proporção 1:225 (enzima:substrato) após 30 min de incubação a pH 6,5. Apenas CapLP hidrolisou de forma significativa as proteínas do lactosoro após 24 horas de incubação. O pré-aquecimento do lactosoro também resultou em um aumento no grau de hidrólise e consequentemente na redução da antigenicidade dos hidrolisados. O leite bovino hidrolisado com CpLP desencadeou respostas imunológicas em um modelo animal de alergia ao leite. Contudo, os leites hidrolisados com CgLP e CapLP não elicitaram sintomas clínicos aparentes após administração oral em animais sensibilizados. As peptidases de DpGp, CgLP e CapLP foram promissoras para o desenvolvimento de novas formulas hipoalergênicas para crianças com alergia ao leite.
Abstract:	Cow’s milk allergy is a global health problem that generally affect infants and children. The disorder in most cases is transitory, however it must be managed to avoid development issues. Hydrolyzed formulas are the most suitable alternative to cow’s milk. Thus, the present study aimed to study the peptidases from laticifer plants and insect midgut able to perform cow’s milk proteins hydrolysis. The hydrolysis assays were performed varying the following parameters: enzyme:substrate ratio, pH and time of reaction. In addition, it was measured the degree of hydrolysis and the residual antigenicity of the hydrolysates. The serine peptidases purified from Danaus plexippus midgut (DpGp) were able to perform caseins hydrolysis at 1:25 (enzyme:substrate ratio), after 4 hours of reaction at pH 9.0. Using the same parameters, whey proteins hydrolysis were performed after 24 hours; however the hydrolysis of pre-heated whey proteins (85 °C for 30 min) caused a reduction in the time of reaction as well as in its antigenicity. The immunoenzymatic assays showed that milk hydrolyzed by DpGp exhibited residual antigenicity similar to commercial partially hydrolyzed formulae. The latex peptidases from Calotropis procera (CpLP), Cryptostegia grandiflora (CgLP) e Carica papaya (CapLP) were able to perform caseins hydrolysis at 1:225 (enzyme:substrate ratio), after 30 min of reaction at pH 6.5. Only CapLP hydrolyzed the whey proteins after 24 hours of reaction. The heat denaturation of the whey proteins also caused an enhance in the degree of hydrolysis and reduced the residual antigenicity of the hydrolysates. The cow’s milk hydrolyzed by CpLP trigged immune reactions in cow’s milk allergy mouse model. However, the milk hydrolyzed by CgLP and CapLP did not elicited clinical symptoms after oral administration in sensitized mice. The peptidases of DpGp, CgLP and CapLP are promising enzymes to develop novel hypoallergenic formulas for children with milk allergy
URI:	http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/37325
Appears in Collections:	DBBM - Dissertações defendidas na UFC

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