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http://repositorio.ufc.br/handle/riufc/78137
Tipo: | Dissertação |
Título : | Desenvolvimento de imunolipossomas anti-EGFR PH-sensíveis para liberação de docetaxel e avaliação anticancerígena em linhagens de células de câncer de próstata |
Autor : | Moreira, Thais da Silva |
Tutor: | Eloy, Josimar de Oliveira |
Co-asesor: | Pessoa, Claudia do Ó |
Palabras clave en portugués brasileño: | Antineoplásicos;Cetuximab;Docetaxel |
Palabras clave en inglés: | Docetaxel;Cetuximab;Antineoplastic Agents |
Áreas de Conocimiento - CNPq: | CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::FARMACOLOGIA |
Fecha de publicación : | 2024 |
Citación : | MOREIRA, Thais da Silva. Desenvolvimento de imunolipossomas anti-EGFR PH-sensíveis para liberação de docetaxel e avaliação anticancerígena em linhagens de células de câncer de próstata. 2024. 93 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2024. Disponível em: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/78137. Acesso em: 10 set. 2024. |
Resumen en portugués brasileño: | O docetaxel (DTX) é um agente antineoplásico utilizado no tratamento do câncer de próstata. No entanto, por ser pouco seletivo e possuir elevada lipofilicidade, a adesão à quimioterapia pelos pacientes é limitada. Desse modo, os lipossomas funcionalizados com cetuximabe possibilitam uma terapia alvo direcionada para o receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR), o qual está superexpresso na membrana das células cancerígenas prostáticas metastáticas. Assim, o presente trabalho objetivou desenvolver imunolipossomas pH sensíveis contendo docetaxel, realizar sua caracterização físico-química e avaliar a eficácia in vitro em linhagens de câncer de próstata. Para a otimização da conjugação ao anticorpo, empregou-se como composição lipídica: fosfatidilcolina de soja (SPC), dioleoilfosfatidiletanolamina (DOPE), hemisuccinato de colesterila (CHEMS) e diestearoilfosfatidiletanolamina associada a polietilenoglicol e maleimida (DSPE-PEGMAL). Os resultados do imunolipossoma mostraram tamanho médio de partícula de 100,46 nm ± 1,01; índice de polidispersão (PDI) de 0,16 ± 0,01; potencial zeta de -15,80 mV ± 0,88, eficiência de encapsulação (EE%) de 81,81 ± 12,5 e eficiência de conjugação (EC%) de 33,84 ± 2,58. No estudo de sensibilidade ao pH, observouse um aumento de 66,9% no tamanho do imunolipossoma em pH 6.4 (tumoral) e um aumento de 99,2% em pH 5.0 (endossomal) após 24 horas de incubação, evidenciando à instabilidade do lipossoma em pH ácido. Na termoforese, os pontos de inflexão do cetuximabe foram mantidos nas amostras de imunolipossomas, o que pode demonstrar a conjugação do anticorpo à nanopartícula e a manutenção da estrutura e estabilidade do anticorpo, garantindo sua estrutura e atividade. O ensaio ELISA indireto sugeriu que o cetuximabe foi conjugado com sucesso ao lipossoma na conformação correta para manter sua funcionalidade de ligação ao EGFR. Em relação à viabilidade celular, o imunolipossoma apresentou maior efeito citotóxico para a célula DU145 (superexpressão de EGFR), com IC50 de 6,17 ± 1,19 nM, quando comparado ao lipossoma e à solução de docetaxel (11,17 ± 1,05 nM e 21,40 ± 3,29 nM, respectivamente). Na linhagem PC3 (baixa expressão de EGFR), o imunolipossoma DTX atingiu IC50 de 66,82 ± 11,59 nM enquanto o lipossoma e o docetaxel apresentaram IC50 de 110,60 ± 19,79 nM e IC50 de 37,54 ± 3,48 nM, respectivamente. A internalização do imunolipossoma foi rápida (15 minutos) e maior (70,17% ± 2,55) quando comparada com a do lipossoma (32,20% ± 0,95) na linhagem celular DU145. Assim, com base nesses resultados, foi possível obter uma formulação de imunolipossoma com características físico-químicas adequadas e manutenção da integridade do anticorpo, proporcionando, como esperado, uma redução na viabilidade de células de câncer de próstata metastático, com alta internalização celular em células que superexpressam EGFR. |
Abstract: | Docetaxel (DTX) is an antineoplastic agent used to treat prostate cancer. However, as it is not very selective and has high lipophilicity, patients' adherence to chemotherapy is limited. In this way, liposomes functionalized with cetuximab enable targeted therapy for the epidermal growth factor receptor (EGFR), which is overexpressed in the membrane of prostate cancer cells. Thus, the present work aimed to develop pH-sensitive immunoliposomes containing docetaxel, carry out their physicochemical characterization and verify their in vitro efficacy in prostate cancer cell lines. To optimize conjugation to the antibody, the following lipid composition was used: soy phosphatidylcholine (SPC), dioleoylphosphatidylethanolamine (DOPE), cholesteryl hemisuccinate (CHEMS) and diestearoylphosphatidylethanolamine associated with polyethylene glycol and maleimide (DSPE-PEGMAL). The immunoliposome results showed an average particle size of 100.46 nm ± 1.01; polydispersity index (PDI) of 0.16 ± 0.01; zeta potential of -15.80 mV ± 0.88, encapsulation efficiency (EE%) of 81.81 ± 12.5 and conjugation efficiency (EC%) of 33.84 ± 2.58. In the pH sensitivity study, a 66.9% increase in immunoliposome size was observed at pH 6.4 (tumor) and a 99.2% increase at pH 5.0 (endosomal) after 24 hours of incubation. In thermophoresis, the inflection points of cetuximab were restricted in the immunoliposome samples, which can demonstrate the conjugation of the antibody to the nanoparticle and the maintenance of the structure and stability of the antibody, ensuring its structure and activity. The indirect ELISA assay suggested that cetuximab was successfully conjugated to the liposome in the correct conformation to maintain its EGFR binding functionality. In relation to the cell solution, the immunoliposome showed a greater cytotoxic effect for the DU145 cell (EGFR overexpression), with an IC50 of 6.17 ± 1.19 nM, when compared to the liposome and docetaxel solution (11.17 ± 1. 05 nM and 21.40 ± 3.29 nM, respectively). In the PC3 lineage (low expression of EGFR), the DTX immunoliposome reached an IC50 of 66.82 ± 11.59 nM while the liposome and docetaxel presented an IC50 of 110.60 ± 19.79 nM and IC50 of 37.54 ± 3, 48 nM, respectively. Internalization of the immunoliposome was rapid (15 minutes) and greater (70.17% ± 2.55) when compared to that of the liposome (32.20% ± 0.95) in the DU145 cell line. Thus, based on these results, it was possible to obtain an immunoliposome formulation with adequate physicochemical characteristics and maintenance of antibody integrity, providing, as expected, a reduction in the prediction of metastatic prostate cancer cells, with high cellular internalization in cells. that overexpress EGFR. |
URI : | http://repositorio.ufc.br/handle/riufc/78137 |
Lattes del autor: | http://lattes.cnpq.br/8599808030740577 |
ORCID del tutor: | https://orcid.org/0000-0003-3219-9969 |
Lattes del tutor: | http://lattes.cnpq.br/0457331724846112 |
ORCID del co-asesor: | https://orcid.org/0000-0002-4344-4336 |
Lattes del co-asesor: | http://lattes.cnpq.br/1305553577433058 |
Derechos de acceso: | Acesso Embargado |
Aparece en las colecciones: | DFAR - Dissertações defendidas na UFC |
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