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dc.contributor.advisorCavada, Benildo Sousa-
dc.contributor.authorCeccatto, Vânia Marilande-
dc.date.accessioned2023-03-27T13:48:12Z-
dc.date.available2023-03-27T13:48:12Z-
dc.date.issued2001-
dc.identifier.citationCECCATTO, Vânia Marilande. Sequência parcial de DNA, caracterização bioquímica da lectina de sementes de Canavalia grandiflora Benth. e suas relações com a filogenia de leguminosas. 2001. Tese (Doutorado em Bioquímica) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2001..pt_BR
dc.identifier.urihttp://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/71459-
dc.descriptionEste documento está disponível online com base na Portaria nº 348, de 08 de dezembro de 2022, disponível em: https://biblioteca.ufc.br/wp-content/uploads/2022/12/portaria348-2022.pdf, que autoriza a digitalização e a disponibilização no Repositório Institucional (RI) da coleção retrospectiva de TCC, dissertações e teses da UFC, sem o termo de anuência prévia dos autores. Em caso de trabalhos com pedidos de patente e/ou de embargo, cabe, exclusivamente, ao autor(a) solicitar a restrição de acesso ou retirada de seu trabalho do RI, mediante apresentação de documento comprobatório à Direção do Sistema de Bibliotecas.pt_BR
dc.description.abstractThe aim of the present work was to obtain a biochemical and molecular profiles of a new lectin isolated from seeds of Canavalia grandiflora Benth. ConGF was isolated by affinity chromatography in Sephadex G-50 and eluted by 0.1 M glucose. SOS-PAGE in the presence of 2-mercaptoehanol of ConGF yielded three distinct bands: a - chain and f3- and y- fragments (25, 50 e 100 kDa, respectively). They are similar with others lectins from sub tribe Diocleinae. ConGF amino acid composition exhibited high amount of aspartic acid, serine and leucine. Methionine and cysteine were not present. The lectin showed immunological identities with lectins from Canavalia species and partial with Dioclea rostrata but not with D. guianensis and Vatairea macrocarpa lectins. The ConGF lectin showed thermodynamic bindings profiles to deoxy analogs as observed with Dioclea lectins. The binding kinetic with glycoproteins exhibited a lectin preference for ofigomannosides, specially Man9. The seed flour PAGE-SOS with 2-mercaptoethanol showed a number of bands similar with the genus Dioclea but not with those from Crafylia floribunda and Cymbosema sp seeds. The lectin present in C. grandffora agglutinated strongly native rabbit erythrocytes and trypsin-treated human A erythrocytes. ConGF was inhibited by mannose, a-D-methyl-pyiranoside, 1-o-Methyl-a-D-glucopyranoside and by the giycoproteins porcine and bovine mucin and bovine lactotransferrin. The genetic studies showed by metaphysic chromosomes analysis on Canavaifa species 2n = 22, like the most Phaseoleae tribe. They are small and very homogeneous. The molecular studies were carried out with the cloning in Escherichia coil, the gene sequencing and the phyilogenetic analysis, including others leguminous iectins. The CTBA was efficient for extraction of DNA, showing a single band, in agarose gel, with 23.000 bp. The PCR amplification in genomic DNA and recombinant plasmids was effected with homologous primers of ConBr (Canavalia brasiliensis) gene, presenting only a band with 870 bp. The same DNA band was obtained in the PCR with plasmids from alkaline hydrolysis in E. coil clones, which confirms the transformation by the bacteria. The phylogenetic studies upon 70 amino acid sequences of Fabaceae lectins, clearly defined the Diocleinae subtribe and the Vicieae tribe. Furthermore, the results showed a evolutionary affinities between Gaiegeae-Vicieae-Trifolieae, Phaseoleae and Sophoreae-Genisteae groups. The evolutive study use the Ks and KA frequencies in nucleotide sequences of legume lectins, showed Kimura neutralist theory possibilities.pt_BR
dc.language.isopt_BRpt_BR
dc.subjectCanavalia grandiflora Benth.pt_BR
dc.subjectLectinas de plantas - Genéticapt_BR
dc.titleSeqüência parcial de DNA, caracterização bioquímica da lectina de sementes de Canavalia grandiflora Benth. e suas relações com a filogenia de leguminosaspt_BR
dc.typeTesept_BR
dc.description.abstract-ptbrEste trabalho buscou caracterizar bioquimica e molecularmente uma nova lectina obtida de sementes de Canavalia grandiflora Benth. A lectina de sementes de C. grandiflora Benth. (ConGF) foi isolada através de cromatografia de afinidade em Sephadex G-50, eluida com glicose 0,1 M. Apresentou três bandas em eletroforese de gel de poliacrilamida em presença de SDS e 2-mercaptoetanol: cadeia a e fragmentos 13 e y, respectivamente, com-25, 50 e 100 kDa, análogos à outras lectinas da subtribo Diocleinae. A composição de aminoácidos da ConGF revelou alto teor de ácido áspartico serina e leucina. Não se detectou metionina nem cisteina. A ConGF mostrou identidade imunológica total com as Canavalias testadas, parcial com Dioclea rostrata e sem reação com Dioclea guianensis e Vatairea macrocarpa. A ConGF mostrou padrões de ligação termodinâmicos aos análogos deóxi semelhantes aos encontrados para outras lectinas de Diocleinae. Os perfis eletroforéticos em presença de SDS e 2-mercaptoetanol revelaram que a farinha de sementes de C. grandiflora Benth. apresentou mais bandas em comum com o gênero Dioclea do que com as espécies da tribo Phaseoleae Cratylia floribunda e Cymbosema sp. A atividade biológica da ConGF revelou alta atividade hemagiutinante com eritrócitos de coelho não tratados e eritrócitos humanos tipo A, tratados com tripsina. A hemaglutinação em eritrócitos de coelho foi inibida por manose, a-D-metil-piranosideo, 1-o-Metil-a-Dglicopiranosideo e as glicoproteinas: mucina suína e bovine e lactotransferina bovina. A sequência parcial de aminoácidos e nucleotideos mostrou alta homologia estrutural com as outras sequências de aminoácidos de Diocleinae O estudo genético revelou, na análise de cromossomos de espécies de Canavafia na metáfase, 2n = 22, número de cromossomos encontrado na maioria das espécies da tribo Phaseoleae. Os cromossomos metafásicos são pequenos e extremamente homogêneos, o que dificultou a preparação de um cariótipo. Os estudos moleculares envolveram a clonagem do gene ConGF em Escherichia cale, o sequenciamento e a análise filogenética, incluindo outras lectinas de leguminosas sequenciadas. Para a clonagem, inicialmente, o reagente CTAB mostrou-se eficiente na extração do DNA genômico, apresentando uma banda única, em gel de agarose, de 23.000 pb, sem arrastes. A amplificação do gene ConGF em DNA genâmico foi efetuada com iniciadores do gene homógo ConBr de Canavalia brasilíensís, apresentando uma banda única formada por produtos de PCR, em gel de agarose, equivalentes à 870 pb. A mesma banda foi obtida na reação de PCR com plasmideos-extraidos por hidrólise alcalina em clones de Escherichia coif, atestando a ocorrência de transformação das bactérias. O estudo filogenético feito com 70 sequências de aminoácidos de lectinas do grupo Fabaceae (= Papilionoideae), apesar de muitas incongruências, definiu claramente a subtribo Diocleinae, a tribo Vicieae e mostrou que alguns grupos evolutivamente afins, como Galegeae-VicieaeTrifolieae, Phaseoleae e Sophoreae-Genisteae puderam ser definidos. O estudo evolutivo envolvendo o cálculo das taxas de Ks (taxas de mutações sinônimas) e KA (taxas de mutações não sinónimas) em sequências de nucleotideos de lectinas de leguminosas mostraram que estas apóiam a teoria neutralista de Kimura.pt_BR
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