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Tipo: TCC
Título: Cultivo in vitro de óvulos de meloeiro
Autor(es): Carvalho, Alexya Vitória Felix
Orientador: Gallão, Maria Izabel
Coorientador: Carvalho, Ana Cristina Portugal Pinto de
Palavras-chave: Cucumis melo L.;Ginogênese;Linhagem pura
Data do documento: 2018
Citação: CARVALHO, Alexya Vitória Felix. Cultivo in vitro de óvulos de meloeiro. 37 f. Trabalho de conclusão de curso (Bacharelado em Ciências Biológicas) – Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2018.
Resumo: O meloeiro (Cucumis melo L.) é uma hortaliça de grande importância econômica mundial. A produção de dihaploides é uma alternativa promissora para reduzir o tempo de obtenção de linhagens homozigotas. No entanto, em meloeiro, a eficiência desse método é baixa, principalmente na etapa de regeneração das plantas haploides. A cultura in vitro de óvulos é uma via para a obtenção desses haploides. Portanto, objetivou se com este trabalho a obtenção de plantas haploides de meloeiro por meio do cultivo in vitro de óvulos. Óvulos das variedades botânicas: inodorus; cantalupensis e reticulatus, foram excisados de flores com ovários não polinizados, colhidas um dia antes da antese, a partir de plantas mantidas em casa de vegetação. Na etapa de calogênese, os óvulos foram colocados em meio MS + 1,0 μM de 6 benzilaminopurina (BAP) e 2,0 μM de ácido naftalenoacético (ANA), por oito semanas, a 25 ± 1 ºC, inicialmente no escuro por uma semana e posteriormente no claro, sob fotoperíodo de 16 horas de luz. O delineamento foi inteiramente casualizado, sendo cada variedade botânica um tratamento, com 15 repetições de 10 tubos de ensaio (contendo dois óvulos cada). Aos 60 dias, foi avaliada a indução de calos nos explantes. Para regeneração de parte aérea, os calos das variedades inodorus e cantalupensis foram transferidos para o meio MS + BAP, nas concentrações: 0,0; 2,22, 4,44, 6,66 e 8,88 μM, por 60 dias, a 25 ± 1 ºC, sob fotoperíodo de 16 horas de luz. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, em esquema fatorial 2x5, sendo duas variedades botânicas e cinco meios de cultivo, com 10 repetições de cinco tubos cada (um calo por tubo). Os dados foram submetidos à análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. Nos estudos histológicos, os calos formados a partir do cultivo in vitro de óvulos foram fixadas em solução de Karnovsky aos dias 0, 30 e 60 após a inoculação em meio para a indução a calogênese e aos 15, 30, 45 e 60 dias após a inoculação em meios para a regeneração de parte aérea. Houve diferença significativa para a média de formação de calos nas três variedades botânicas estudadas. A variedade inodorus foi a mais eficiente, produzindo calos em 60,65% dos óvulos avaliados, diferindo estatisticamente das variedades cantalupensis (37,65%) e reticulatus (18,65%). Já na fase de regeneração de parte aérea, não houve formação de gemas nos meios testados para as duas variedades. As análises histológicas mostraram presença de amido e formação de vasos condutores, principalmente nos calos submetidos aos meios para regeneração de parte aérea. Portanto, o protocolo utilizado não foi eficiente para obtenção de plantas haploides das três variedades de meloeiro estudadas.
Abstract: The melon (Cucumis melo L.) is a vegetable of worldwide economic importance. The production of dihaploids is a promising alternative to reduce the time to obtain homozygous strains. However, in melon, the efficiency of this method is low, mainly in the stage of regeneration of haploid plants. The in vitro culture of ovules is a way to obtain these haploids. Therefore, the objective of this work was to obtain melon haploid plants by in vitro ovule culture. Ovules of botanical varieties: inodorus, cantalupensis and reticulatus, were excised from flowers with unpollinated ovaries, harvested one day before anthesis, from plants kept in a greenhouse. In the calogenesis step, the ovules were placed in MS + 1.0 μM 6 benzylaminopurine (BAP) and 2.0 μM naphthaleneacetic acid (NAA) for eight weeks at 25 ± 1 ° C, initially in the dark for one week and later in the clear, under photoperiod of 16 hours of light. The design was completely randomized, with each botanical variety being treated with 15 replicates of 10 test tubes (containing two eggs each). At 60 days, callus induction was evaluated in the explants. For aerial part regeneration, calli inodorus and cantalupensis were transferred to the MS + BAP medium at concentrations of: 0.00, 2.22, 4.44, 6.66 and 8.88 μM for 60 days at 25 ± 1 ° C, under a photoperiod of 16 hours of light. The experimental design was completely randomized, in a 2x5 factorial scheme, with two botanical varieties and five culture media, with 10 replicates of five tubes each (one callus per tube). The data were submitted to analysis of variance and the means were compared by the Tukey test at 5% probability. In the histological studies, calli formed from in vitro egg culture were fixed in Karnovsky's solution at days 0, 30 and 60 after inoculation in medium for the induction of calogenesis and at 15, 30, 45 and 60 days after inoculation in means for aerial part regeneration. There was a significant difference for the average callus formation in the three botanical varieties studied. The inodorus variety was the most efficient, producing calluses in 60.65% of the evaluated ovules, differing statistically from the cantalupensis (37.65%) and reticulatus (18.65%) varieties. In the aerial part regeneration phase, there was no bud formation in the media tested for the two varieties. Histological analysis showed presence of starch and formation of conducting vessels, mainly in the callus submitted to the means for aerial part regeneration. Therefore, the protocol used was not efficient to obtain haploid plants of the three varieties of melon studied.
URI: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/68808
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