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http://repositorio.ufc.br/handle/riufc/64237| Tipo: | Tese |
| Título: | Perfil proteômico de complexos cumulus-oócito e embriões ovinos produzidos in vitro |
| Título em inglês: | Proteomic profile of cumulus-oocyte complexes and sheep embryos produced in vitro |
| Autor(es): | Passos, José Renato de Sousa |
| Orientador: | Moura, Arlindo de Alencar Araripe Noronha |
| Coorientador: | Figueiredo, José Ricardo de |
| Palavras-chave: | Proteínas;Espectrometria de massas;Folículo;Fecundação in vitro;Ovelha |
| Data do documento: | 2020 |
| Citação: | PASSOS, José Renato de Sousa. Perfil proteômico de complexos cumulus-oócito e embriões ovinos produzidos in vitro. 2020. 154 f. Tese (Doutorado em Zootecnia) – Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2020. |
| Resumo: | O estudo 1 teve como objetivo descrever o proteoma de complexos cumulus-oócito (COCs) ovino utilizando a espectrometria de massa (EM) com abordagem de proteômica shotgun. O estudo 2 teve como objetivo caracterizar o proteoma de embriões ovinos no estágio inicial de desenvolvimento. No estudo 1, as amostras foram coletadas de ovários de ovelhas adultas e as proteínas de CCOs não maturados e CCOs maturados in vitro foram submetidos à eletroforese unidimensional (1D) em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) e identificadas por EM. A digestão de proteínas em gel e a análise dos peptídeos por EM revelaram 2.416 e 2.426 proteínas não-redundantes em CCOs não maturados e maturados, respectivamente, em três repetições biológicas com identificação precisa. Os dados proteômicos foram analisados de acordo com a ontologia gênica e uma rede de interação proteína-proteína e, em seguida, foram identificados vários tipos de proteínas em COC não maturados envolvidas com regulação transcricional e metabolismo energético. As proteínas identificadas em CCOs maturados estavam relacionadas principalmente à proliferação celular, e enzimas envolvidas no remodelamento da matriz extracelular, e as proteínas diferencialmente expressas foram analisadas através do False Discovery Rate (FDR <0,05), havendo diferenças significativas abundantes em 648 proteínas entre o COCs não maturado e maturado, com 385 proteínas up-regulated e 263 down-regulated. Este estudo fornece a primeira caracterização de maneira precisa em CCOs ovinos, e foi possível identificar proteínas essenciais envolvidas na maturação oocitária e desenvolvimento embrionário inicial. Para o estudo 2, as proteínas de embriões foram submetidas à eletroforese unidimensional (1D) e identificadas pela EM. A digestão de proteínas no gel e análise dos peptídeos através de EM revelou 2.292 proteínas não redundantes em embriões, em três réplicas biológicas com a identificação precisa. Os dados proteômicos foram analisados de acordo com a ontologia gênica e, em seguida, foram identificados nos embriões diversos tipos de proteínas envolvidas com regulação transcricional e metabolismo energético. Ressalta-se a presença de proteínas que estão envolvidas na proteção dos oócitos, entre outras funções, proteínas relacionadas ao metabolismo e produção de energia e proteínas que estão relacionadas à adesão celular e à organização da matriz extracelular. Este estudo fornece a primeira caracterização em embriões ovinos, sendo possível identificar proteínas essenciais implicadas no desenvolvimento embrionário como biomarcadores de qualidade de embriões. |
| Abstract: | The first study aimed to describe the proteome of ovine cumulus-oocyte complex (COC) by using a mass spectrometry (MS) with a shotgun proteomics approach. The second study aimed to characterize the proteome of ovine embryos at early development stage. In the first study, the samples were collected from ovaries of adult ewes, and immature CCO proteins as well in vitro mature CCO proteins were subjected to the one-dimensional (1D) sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and identified by MS. In-gel protein digestion and peptide analysis with MS has revealed 2.416 and 2.426\ nonredundant proteins in immature and matured COC, respectively, within three biological replicates with accurate identification. The proteomic data were analyzed according to the gene ontology and a protein-protein interaction network, then several types of proteins involved in immature COC with transcriptional regulation and energy metabolism were identified. Proteins identified in mature COC were mainly related to cell proliferation and enzymes involved in the remodeling of the extracellular matrix, and the proteins differentially expressed were analyzed by False Discovery Rate (FDR <0.05) which were significantly different with abundance in 648 proteins between the immature and mature COC, with 385 up-regulated proteins and 263 down-regulated proteins. This study provides the first accurate characterization in ovine COCs, being possible to identify essentials proteins involved in the oocyte maturation and early embryo development. For the second study, embryo proteins were subjected to one-dimensional (1D) electrophoresis and identified by MS. In-gel protein digestion and peptide analysis with MS revealed 2,292 nonredundant proteins in embryos, within three biological replicates with accurate identification. Proteomic data were analyzed according to the gene ontology, then several types of proteins involved with transcriptional regulation and energy metabolism were identified in embryos. The presence of proteins involved in oocyte protection, among other functions, proteins related to metabolism and energy production, and proteins that are related to cell adhesion and to the organization of the extracellular matrix are emphasized. This study provides the first characterization in ovine embryos, being possible to identify essential proteins involved in embryonic development as possible embryo quality biomarkers. |
| URI: | http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/64237 |
| Aparece nas coleções: | PPGZO - Teses defendidas na UFC |
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