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Tipo: TCC
Título : Purificação e caracterização de uma nova peroxidase oriunda de raízes de feijão-de-corda [Vigna unguiculata (L.) Walp.] e prospecção de atividade antifúngica e removedora de fenóis
Autor : Albuquerque, Louise Magalhães
Tutor: Oliveira, José Tadeu Abreu de
Palabras clave : Leguminosae;Peróxido de hidrogênio;Vigna unguiculata;Colletotrichum gloeosporioides;Fusarium oxysporum
Fecha de publicación : 2017
Citación : ALBUQUERQUE, Louise Magalhães. Purificação e caracterização de uma nova peroxidase oriunda de raízes de feijão-de-corda [Vigna unguiculata (L.) Walp.] e prospecção de atividade antifúngica e removedora de fenóis. 2017. 62 f. TCC (Graduação em Ciências Biológicas) – Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017.
Resumen en portugués brasileño: As peroxidases (POXs) são enzimas capazes de catalisar a oxidação de uma miríade de substratos e desempenham funções importantes na defesa vegetal contra patógenos, atuando na eliminação de H2O2 e biossíntese de lignina. Além disso, as POXs são de grande interesse, uma vez que podem ser aplicadas na medicina, agricultura e na biotecnologia, como biossensores. Neste trabalho uma peroxidase foi purificada a partir das raízes de feijão-de-corda (Vigna unguiculata) do genótipo TE97-411-1F. Após a extração de proteínas solúveis totais com tampão acetato de sódio, 0,05 M, pH 5,2, contendo 0,15 M de NaCl, seguido da precipitação com sulfato de amônio (0-90% de saturação), a fração obtida (F0/90) foi aplicada em coluna cromatográfica tendo quitina como fase estacionária, ficando a atividade peroxidásica concentrada no pico não retido (PNRQ). O PNRQ foi cromatografado em coluna de troca iônica, e a peroxidase de interesse, denominada POX100, purificada após eluição com 0,1 M de NaCl, como verificado por SDS-PAGE. Análise por espectrometria de massas (ESI-QUAD-TOF) indicou alta similaridade entre a POX100 e peroxidases de outras leguminosas. Análises da proteína pura indicaram que a POX100 é uma glicoproteína composta por uma única cadeia polipeptídica de 58 kDa, com pI = 3,79. Exibiu excelente estabilidade térmica até à temperatura de 60 °C, durante 120 minutos de tratamento. Seu ótimo de atividade enzimática foi obtido em pH=6,0, usando guaiacol como substrato. Em ensaios in vitro de remoção de compostos fenólicos, foi obtido degradação de 48% do guaiacol após 1 h de reação. Em ensaio na presença de íons e aditivos foi observada significativo aumento de atividade na presença de EDTA, e significativa inibição por DTT, Azida de Sódio e Bissulfito de sódio. Além disso, foi avaliado o seu potencial antifúngico, observando-se leve atividade inibitória do crescimento vegetativo dos fungos fitopatogênicos Colletotrichum gloeosporioides e Fusarium oxysporum.
Abstract: Peroxidases (POXs) are enzymes that catalyze the oxidation of a variety of substrates and play important functions in plant defense against pathogens, acting on H2O2 scavenging and lignin biosynthesis. Because of their broad applicability in medicine, agriculture and biotechnology as biosensor systems, POXs became significantly relevant. In this work, a peroxidase was purified from cowpea (Vigna unguiculata) roots of genotype TE97-411-1F. After total soluble proteins extraction with 0.05 M sodium acetate buffer pH 5.2, containing 0,15 M NaCl, followed by ammonium sulfate precipitation (0-90% saturation), the obtained fraction (F0/90) was inserted in a chromatography column containing chitin as stationary phase, by which the peroxidase activity was concentrated on the non-retained peak (PNRQ). The PNRQ was loaded in an ion exchange column, and the peroxidase of interest, denominated POX100, was purified after been eluted with 0,1 M NaCl, as shown by SDS-PAGE. Analysis by mass spectrometry (ESI-QUAD-TOF) indicated a high similarity between the POX100 and others leguminous peroxidases. An analysis of a pure protein showed that POX100 is a glycoprotein composed by a single 58 kDa polipeptidic chain, with IEP = 3,79. It presented an excellent thermal stability up to 60°C, during 120 minutes of treatment. Its high enzymatic activity, using guaiacol as substrate, was achieved at pH 6.0. In vitro phenolic compounds removal assays, the degradation of 48% of guaiacol was observed within 1 h of reaction. On the assay with presence of ions and additives, significant enhancement of the activity in the presence of EDTA and significant inhibition by DTT, Sodium Azide and Sodium Bisulfite were noticed. Furthermore, the analysis of antifungal potential exhibited a mild inhibitory activity of the vegetative growth of phytopathogenic fungi Colletotrichum gloeosporioides and Fusarium oxysporum.
URI : http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/61667
Aparece en las colecciones: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS - BACHARELADO - Monografias

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