Peptidases intestinais de Danaus plexippus L. como uma nova perspectiva na produção de um leite hipoalergênico

Oliveira, João Pedro Brasil de

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Tipo:	TCC
Título:	Peptidases intestinais de Danaus plexippus L. como uma nova perspectiva na produção de um leite hipoalergênico
Autor(es):	Oliveira, João Pedro Brasil de
Orientador:	Freitas, Cleverson Diniz Teixeira de
Palavras-chave:	Leite hipoalergênico;peptidases;Danaus plexippus
Data do documento:	2016
Citação:	OLIVEIRA, João Pedro Brasil de. Peptidases intestinais de Danaus plexippus L. como uma nova perspectiva na produção de um leite hipoalergênico. 2016. 62 f. Trabalho de conclusão de curso (Graduação em Ciências Biológicas) – Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016.
Resumo:	A principal fonte de alergia alimentar em crianças é o leite bovino e a falta de tratamento adequado pode trazer sérias consequências para o desenvolvimento da criança, por provocar problemas gastrointestinais, respiratórios e dermatológicos. A alergia está associada às proteínas do leite, principalmente, às caseínas, que representam 80% do total das proteínas do leite. O restante (20%) é constituído das proteínas do soro, principalmente, α-lactalbumina (α-LA) e β-lactoglobulina (β-LG). Muitos são os métodos utilizados para a redução da alergenicidade do leite, dentre eles destaca-se a digestão enzimática de suas proteínas por peptidases. Este trabalho teve como objetivo avaliar o potencial das peptidases intestinais de lagartas da espécie Danaus plexippus na hidrólise das proteínas presentes no leite. Foram realizados ensaios proteolíticos com as peptidases intestinais em diferentes valores de pH e a atividade proteolítica residual do extrato foi determinada através do tempo de incubação. A capacidade de hidrolisar as proteínas do leite foi analisada por gel zimograma utilizando diferentes substratos e através de ensaios in vitro. Foi utilizado cromatografia de troca iônica (CM e DEAE-sepharose) e afinidade (HiTrap-Benzamidina) na tentativa de purificação de uma das proteínas presentes do extrato intestinal total. A atividade enzimática do extrato intestinal de D. plexippus foi 2,6 vezes maior em pH 9,0 comparado a pH 6,5. As enzimas proteolíticas presentes nesse extrato mantêm-se estáveis durante uma hora de reação, porém após 24 horas, a atividade residual foi de 44%. As peptidases intestinais foram capazes de hidrolisar extensivamente as caseínas, porém as proteínas do soro foram mais resistentes à hidrólise enzimática, sendo necessário o pré-aquecimento das proteínas presentes nessa fração. Foi demonstrado a ausência de proteínas positivamente carregadas, no extrato total, em pH neutro. Através da coluna de afinidade, foi observado duas peptidases serínicas no extrato total, sendo uma delas capaz de hidrolisar as proteínas do leite. As peptidases intestinais de D. plexippus apresentam um potencial para a produção de hidrolisados hipoalergênico do leite bovino, uma vez que são capazes de hidrolisar as proteínas do lactosoro de forma parcial e as caseínas de forma extensiva. Contudo mais ensaios precisam ser realizados para validar o potencial dessas peptidases.
Abstract:	The main source of food allergy in childhood is the bovine milk and the lack of treatment may cause gastrointestinal, breathing and dermatological problems. Milk allergy is caused by its proteins, the caseins represent 80% of all proteins present in milk. The whey protein fraction (20%) is composed, mainly, by α lactalbimin and β-lactoglobulin. The aim of this study was to evaluate the potential of gut peptidases from Danaus plexuppus in the hydrolysis of milk proteins. Proteolytic assay was performed in different values of pH and the residual proteolytic activity of the extract was determined in different times of reaction. The ability to hydrolyze the milk proteins was determined by zimograma using different substrate and in vitro assay. It was performed ion exchange chromatography (CM and DEAE-Sepharose) and affinity chromatography (HiTrap-Benzamidine) to purify one of the proteins of the crude extract. The proteolytic activity of the gut extract was 2.6x higher in pH 9.0 compared to pH 6.5. The gut peptidases from D. plexippus stayed stable in the first hour of the reaction, but after 24 hours, the residual activity represented 44% of the original. The gut peptidases were able to hydrolyze the casein fraction (an extensive hydrolysis). The whey proteins fraction presented a significant hydrolysis degree only after pre incubation in denaturant temperatures. It was reported the lack of positive proteins, in the gut extract, in pH 7.2. Two serine peptidases were separated from the gut extract in the affinity chromatography and one of them was able to hydrolyze all the milk proteins tested in this study. The gut peptidases from D. plexuppus presented a potential in the production of hypoallergenic hydrolysates of the bovine milk once they are able to extensively hydrolysate the casein fraction and partially hydrolysates the whey protein fraction. Further tests, however, need to be performed to validate the potential of these peptidases.
URI:	http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/48081
Aparece nas coleções:	CIÊNCIAS BIOLÓGICAS - BACHARELADO - Monografias

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