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http://repositorio.ufc.br/handle/riufc/35500| Tipo: | TCC |
| Título : | Microesferas de quitosana sulfatadas com potencial aplicação em purificação de IgG: estudo das condições operacionais |
| Autor : | Oliveira, Francisco de Assis Ferreira de |
| Tutor: | Silvia Júnior, Ivanildo José |
| Co-asesor: | Laurentino, Larissa da Silva |
| Palabras clave : | Imunoglobulinas;Cromatografia por troca iônica;Quitosana;Adsorção |
| Fecha de publicación : | 2017 |
| Citación : | OLIVEIRA, F. A. F. (2017) |
| Resumen en portugués brasileño: | As imunoglobulinas do isotipo G (IgG) são proteínas sanguíneas de grande interesse para aplicações terapêuticas e diagnósticos de algumas doenças. Para viabilizar essas aplicações é necessário que a IgG seja obtida em elevado grau de pureza, o que tem motivado o emprego de diversas técnicas de purificação desta. Este trabalho teve por finalidade encontrar melhores condições de adsorção para purificação de IgG humana, utilizando microesferas de quitosana sulfatadas (MQS). Os ensaios adsortivos foram realizados em batelada com IgG humana de alta pureza para analisar a influência do tipo de tampão, da faixa de pH, da massa de adsorvente, da concentração inicial da solução de IgG e do tempo de contato no processo. De acordo com os resultados obtidos, verificou-se uma maior capacidade adsortiva para os ensaios utilizando 5 mg do adsorvente mantidos em contato com solução de IgG 0,75 mg/mL em tampão HEPES a pH 6,8, onde, nessas condições, a quantidade adsorvida foi de aproximadamente 260 mg/g. As cinéticas e isotermas foram obtidas na melhor condição de adsorção. O perfil cinético mostrou que o tempo de equilíbrio foi de 10 horas e os ajustes da isoterma foram satisfatoriamente representados pelos modelos de Langmuir e Langmuir- Freundlich, fornecendo valores de capacidade máxima de adsorção de 306 e 284 mg/g, respectivamente. Comparativamente, foram obtidos os perfis cinéticos e as isotermas para ensaios utilizando como adsorvente microesferas de quitosana não sulfatadas (MQ). Para estas, a adsorção de IgG alcançou o equilíbrio em 6 horas, com quantidade adsorvida de 160 mg/g e os ajustes das isotermas realizados pelos modelos de Langmuir e Langmuir-Freundlich resultaram em capacidades adsortivas de 405 e 466 mg/g, respectivamente. Comparando-se as curvas isotermas obtidas para os dois adsorventes, verificou-se que, em relação às quantidades adsorvidas de imunoglobulina G, as MQS apenas superam as MQ em casos onde a concentração de IgG em solução, no equilíbrio, é de até 0,8 mg/mL. A partir de ensaios com misturas binárias IgG/BSA, em diferentes proporções mássicas, foi possível verificar que a presença de BSA em solução interfere na adsorção de IgG e, por meio de eletroforeses SDSPAGE, pode-se observar que as MQS são mais seletivas à imunoglobulina G do que à albumina. Desse modo, é possível concluir que as MQS têm potencial para aplicação em processos de purificação de IgG, sendo mais apropriadas para processos de concentração da imunoglobulina. |
| Abstract: | Immunoglobulins of G isotype (IgG) are blood proteins of great interest for therapeutic applications and diagnosis of some diseases. To make these applications viable, it is necessary that the IgG obtained has a high degree of purity, which has motivated the use of several purification techniques. This work aimed to find better adsorption conditions for human IgG purification, using sulfated chitosan microspheres (SCM). The adsorbent assays were performed in batch with high purity human IgG to analyze the influence of the buffer’s type, the pH range, the adsorbent mass, the initial concentration og IgG solution and the contact time in the process. According to the obtained results, it was observed a greater adsorptive capacity in the assays using 5 mg of the adsorbent kept in contact with 0.75 mg/mL IgG solution in HEPES buffer at pH 6.8, in which, under these conditions, the adsorbed amount was about 260 mg/g. The kinetics and isotherms were obtained in the best adsorption condition. The kinetic adsorption profile shows that the equilibrium time was 10 hours and the isotherm adjustments were satisfactorily represented by the Langmuir and Langmuir- Freundlich models, providing maximum adsorption capacity values of 306 and 284 mg/g, respectively. Comparatively, the kinetic profiles and the isotherms were obtained for assays using as adsorbent non-sulfated chitosan microspheres (CM). To these, the adsorption of IgG reached the equilibrium in 6 hours, with adsorbed amount of 160 mg/g and the isothermal adjustments made with the Langmuir and Langmuir-Freundlich models resulted in adsorptive capacities of 405 and 466 mg/g respectively. Comparing the isothermal curves obtained for the two adsorbents, it was found that, in relation to the adsorbed amounts of immunoglobulin G, the SCM surpasses the CM only in cases where the IgG concentration in solution, at equilibrium, is up to 0.8 mg/mL. From the assays with IgG/BSA binary mixtures, in different mass proportions, it was possible to verify that the presence of BSA in solution interferes in the adsorption of IgG and, by SDS-PAGE electrophoresis, it can be observed that the SCM are more selective to immunoglobulin G than to albumin. Thus, it is possible to conclude that SCM have potential for application in IgG purification processes, being more appropriate for immunoglobulin concentration processes. |
| URI : | http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/35500 |
| Aparece en las colecciones: | ENGENHARIA QUÍMICA - Monografias |
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