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http://repositorio.ufc.br/handle/riufc/13593| Type: | Dissertação |
| Title: | Detecção e quantificação de mycobacterium leprae pela técnica de pcr em tempo real em amostras ambientais de municípios do Ceará |
| Title in English: | Detection and quantification of mycobacterium leprae by real time pcr from environmental samples of Ceará municipalities |
| Authors: | Holanda, Maisa Viana de |
| Advisor: | Frota, Cristiane Cunha |
| Keywords: | Mycobacterium leprae;DNA;Ingestão de Líquidos |
| Issue Date: | 2015 |
| Citation: | HOLANDA, M. V. Detecção e quantificação de mycobacterium leprae pela técnica de pcr em tempo real em amostras ambientais de municípios do Ceará. 2015. 87 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. |
| Abstract in Brazilian Portuguese: | A hanseníase é uma doença infecciosa crônica e granulomatosa responsável por afetar a pele e os nervos periféricos, sendo ocasionada pelo Mycobacterium leprae, um agente intracelular obrigatório incapaz de ser cultivado em meios de cultura axênicos. No ano de 2012, foram detectados 232.857 casos novos no mundo, sendo desses 33.303 (14, 30%) detectados somente no Brasil. O Estado do Ceará diagnosticou 2.066 casos novos só no ano de 2012, com um coeficiente detecção geral de 24,0/100.000 habitantes. A transmissão da doença está relacionada com eliminação dos bacilos provenientes de pacientes multibacilares através do trato respiratório superior e, como a bactéria fica em suspensão no ar, ocorre a posterior contaminação de outra pessoa. A existência de casos clínicos da doença nos quais os pacientes não tiveram nenhum contato anterior com portadores de hanseníase e, ainda, áreas com casos próximos de fontes de água sugere infecção do ser humano com fontes ambientais. Por isso, atualmente, pesquisa-se a possível interferência de fatores ambientais e animais silvestres na transmissão da hanseníase, como solo, água, vegetação e tatus. O ambiente funcionaria como uma espécie de reservatório, permitindo que o bacilo permaneça infeccioso após longos períodos fora do corpo humano. Este estudo tem como objetivo principal detectar e quantificar bacilos de M. leprae por qPCR em amostras de águas ambientais provenientes de municípios cearenses. Foram coletadas cinco réplicas de cada um dos 30 reservatórios selecionados, totalizando 149 amostras. O DNA total foi extraído através de kit específico para amostras ambientais de acordo com as recomendações do fabricante. Posteriormente, foi realizado a amplificação do gene 16S rRNA de M. leprae através de qPCR com o uso do kit SYBR Green PCR Master Mix. Utilizou-se uma curva padrão com concentrações conhecidas de plasmídeo pIDTBlue 16SrRNAMlep para quantificar o DNA presente nas amostras ambientais. As amostras ambientais do município de Juazeiro do Norte e as amostras clínicas provenientes de pacientes atendidos no CDREM foram genotipadas e subtipadas por PCR-RFLP. O DNA de M. leprae foi detectado em todos os municípios estudados. Do total de 149 amostras de água analisadas, 81 (54,4%) foram positivas para a pesquisa de DNA. O número de cópias de M. leprae se manteve no intervalo de 1,42 x 10-1 a 1,44 x 10+2 . A maioria das amostras clínicas apresentou genótipo 4 (64%) enquanto que 100% das amostras de Juazeiro do Norte foram SNP 4. Com relação a subtipagem, o SNP 4-N foi o mais presente dentre as amostras analisadas. Este estudo indica a existência de DNA de M. leprae nas amostras de águas ambientais, mostrando fundamentalmente a presença de bacilos nas águas analisadas. Também relata que a maioria das cepas de M. leprae das fontes ambientais estudadas é do mesmo subtipo das isoladas do homem. Dessa forma, são necessários mais estudos a fim de ampliar o conhecimento da influência da água na transmissão da hanseníase. |
| Abstract: | ABSTRACT Leprosy is a chronic granulomatous infectious disease occasioning damage in skin and peripheral nerves, caused by Mycobacterium leprae , an intr a cellular agent unable to grown in axenic culture media. In 2012 , 232.857 new cases were detected, and out of these 33.303 (14, 30%) were detected only in Brazil. Ceará diagnosed 2,066 new cases only in 2012, with an overall detection ratio of 24.0 / 100,000 i nhabitants . Transmission is related to the bacilli eliminate from MB patients by the upper respira tory route and consequent contamination the air . The existence of clinical cases in which patients had no previous contact with leprosy patients and also the finding of cases near water source s suggests infection of humans by environmental sources . C urrently, it is suggested the possible influence of environmental factors and wild animals in the transmission of leprosy as soil, water, vegetation and armadillos. The environment behave as a kind of reservoir, allowing infectious bacilli remain viable af ter long perio ds outside the body. This study aims to detect and quantify M. leprae bacillus by qPCR environmental water samples from Ceará municipalities . Five samples from each one of the 30 water reservoir were collected, being a total of 149 samples. Total DNA was extracted by specific environmental samples kit according to the manufacturer's recommendations. Subsequently, was performed the amplification of M. leprae 16S rRNA gene by qPCR using the SYBR Green PCR Master Mix kit. We used a standard curv e with known concentrations of pIDTBlue 16SrRNAMlep plasmid to quantify the DNA present in environmental samples. Environmental samples of Juazeiro do Norte municipality and clinical samples from patients treated at CDREM were genotyped and subtyped by PCR - RFLP. M. leprae ’s DNA was detected in all the districts studied. Out of the total of 149 w ater samples analyzed, 81 (54.4 %) were positive for the detection of DNA. The number of copies of M. leprae was in the range of 1,42 x 10 - 1 to 1,44 x 10 + 2 . Most clinical samples presented genotype 4 (64%) whereas 100% of Juazeiro samples were SNP 4. T he SNP 4 - N was the most present both among the clinical l and environmental samples. This study indicates the presence of M. leprae DNA in samples of en vironmental wate r, essentially demonstrates the presence of bacilli in the water analyzed . Thus, further studies are needed in order to enhance knowledge of the influence of the water in the transmission of leprosy. |
| URI: | http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/13593 |
| Appears in Collections: | DPML - Dissertações defendidas na UFC |
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