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Tipo: Tese
Título: Potencialização da atividade larvicida das toxinas de Bacillus thuringiensis pelo inibidor de tripsina de sementes de Albizia lebbeck contra larvas do gênero Aedes
Título em inglês: Potentialization of larvicidal toxins from Bacillus thuringiensis by the trypsin inhibitor from the seeds of Albizia lebbeck (l.) Benth. against mosquitos of the genus Aedes
Autor(es): Tabosa, Pedro Matheus Sousa
Orientador: Carvalho, Ana de Fátima Fontenele Urano
Palavras-chave: Inibidor de protease;Proteínas Cry;Larvicida;Arboviroses
Data do documento: 2023
Citação: TABOSA, Pedro Matheus Sousa. Potencialização da atividade larvicida das toxinas de Bacillus thuringiensis pelo inibidor de tripsina de sementes de Albizia lebbeck contra larvas do gênero Aedes. 2023. 75 f. Tese (Doutorado em Bioquímica) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2023.
Resumo: Os mosquitos como Aedes aegypti e Ae. albopictus têm chamado a atenção mundial por serem responsáveis pela transmissão de vários vírus, como a dengue, chikungunya e Zika. Existem diversos programas e estratégias para evitar o aumento e tentar diminuir o número de casos dessas doenças, sendo a principal aquela por meio do combate aos vetores. Dentre as formas de controle, as moléculas naturais como os inibidores de tripsina podem ser utilizadas para redução das populações desses insetos, sendo estas de baixa toxicidade aos organismos não-alvos e de maior biodegradabilidade. Assim, o objetivo deste trabalho é avaliar a potencialização das toxinas de Bacillus thuringiensis (Bt) por um inibidor de tripsina de sementes de Albizia lebbeck (L.) Benth sobre o desenvolvimento de larvas de Aedes aegypti e Ae. albopictus, bem como avaliar a toxicidade sobre náuplios de Artemia sp. E embriões de Danio rerio. O inibidor de tripsina AlsTI purificado das sementes de A. lebbeck foi capaz de inibir a tripsina e as proteases intestinais das larvas de Ae. aegypti e Ae. albopictus. O AlsTI foi confirmado em uma única banda em condições não redutoras no SDS-PAGE com uma massa molecular aproximada de 20 kDa e os dados do sequenciamento parcial mostraram que este inibidor pertence ao grupo do tipo Kunitz. Além disso, o inibidor de tripsina apresentou resistência quando submetido a diferentes condições de temperatura, pH e a condições redutoras. As toxinas de Bt demonstraram toxicidade (CL50 e CL20) às larvas de Ae. aegypti e Ae. albopictus, onde os danos no intestino médio foram confirmados pelas análises histológicas. Somado a isso, o AlsTI foi capaz de aumentar a mortalidade das larvas de Ae. aegypti quando combinado com as proteínas tóxicas do Bt cerca de duas a três vezes, mas o mesmo não aconteceu para as da espécie Ae. albopictus. Em organismos não-alvo, a toxicidade destas moléculas não foi observada quando testadas combinadas ou separadas contra náuplios de Artemia sp. Contudo, 20% de mortalidade em embriões de Danio rerio foi observada, tanto com as toxinas do Bt quanto em combinação com o inibidor. Os resultados encontrados neste trabalho podem ser utilizados na produção de novos bioinseticidas contra insetos transmissores de doenças do gênero Aedes.
Abstract: Aedes aegypti and Ae. albopictus have attracted worldwide attention because they are responsible for the transmission of several viruses, such as dengue fever, chikungunya and Zika. There are several programs and strategies to avoid the increase in number of cases of these diseases, such as by combating vectors. Natural molecules, such trypsin inhibitors, with no or low toxicity to non-target organisms and greater biodegradability can be used to reduce the populations of these insects. Thus, the objective of this work is to evaluate the potentiation of Bacillus thuringiensis (Bt) toxins by a trypsin inhibitor from Albizia lebbeck (L.) Benth seeds on the development of Ae. aegypti and Ae. albopictus, as well as to evaluate the toxicity on non-target organisms. The trypsin inhibitor AlsTI purified from A. lebbeck seeds was able to inhibit trypsin and intestinal proteases of Ae. aegypti and Ae. albopictus larvae. The AlsTI was confirmed as a single band on SDS-PAGE under non-reducing conditions with an approximate molecular mass of 20 kDa and partial sequencing data showed that this inhibitor belongs to the Kunitz- type group. In addition, the trypsin inhibitor showed resistance when subjected to different conditions of temperature, pH and reducing conditions. Bt toxins demonstrated toxicity (LC50 and LC20) against the larvae of both species and the midgut damage was confirmed by histological analyses. In parallel, AlsTI was able to increase the mortality of Ae. aegypti larvae when combined with the Bt toxins about two to three times, but the same did not happen for the Ae. albopictus. In non-target organisms, the toxicity of these molecules was not observed when tested combined or separately against Artemia sp. nauplii. However, a 20% mortality in Danio rerio embryos both in Bt toxins and in combination with the inhibitor was observed. The results obtained in this work may be used in the production of new bioinsecticides against insects that transmit diseases of the genus Aedes.
URI: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/73827
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