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http://repositorio.ufc.br/handle/riufc/63987| Tipo: | Dissertação |
| Título: | Efeito in vitro da proteinase K na matriz do biofilme de fungos dermatofíticos: uma análise das interações com terbinafina e griseofulvina |
| Autor(es): | Lopes, Raissa Geovanna Pereira |
| Orientador: | Brilhante, Raimunda Sâmia Nogueira |
| Palavras-chave: | Arthrodermataceae;Biofilme;Endopeptidase K;Antifúngicos;Matriz Extracelular |
| Data do documento: | 9-Fev-2022 |
| Citação: | LOPES, R. G. P. Efeito in vitro da proteinase K na matriz do biofilme de fungos dermatofíticos: uma análise das interações com terbinafina e griseofulvina. 2022. 96 f. Dissertação ( Mestrado em Ciências Médicas) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2022. Disponível em: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/63987. Acesso em: 17 fev. 2022. |
| Resumo: | A capacidade dos dermatófitos em formar biofilme é um dos fatores de virulência capaz de potencializar a infecção. A matriz extracelular polimérica, cuja composição, como proteína, variam entre os micro-organismos, fornece um microambiente capaz de aumentar a resistência aos antifúngicos. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da proteinase K na matriz extracelular polimérica dos biofilmes maduros de dermatófitos, bem como investigar a interação da proteinase K com terbinafina ou griseofulvina. Inicialmente, foi realizado teste de sensibilidade de células planctônicas, pelo método de microdiluição em caldo, com 14 cepas isoladas de origem animal e humana, sendo Microsporum canis (3), Trichophyton tonsurans (5), Trichophyton mentagrophytes (4), Epidermophyton floccosum (1) Trichophyton rubrum (1). Posteriormente, em microplacas de 96 poços, os biofilmes fortes formadores foram testados frente a proteinase K e com os antifúngicos, sendo avaliados por quantificação de atividade metabólica e biomassa. Depois, a proteinase K foi combinada com terbinafina ou griseofulvina ante biofilmes de M. canis (2) e T. tonsurans (2), por conseguinte, foram avaliadas por meio da atividade metabólica. A arquitetura do biofilme foi analisada pela microscopia eletrônica de varredura e confocal. Os intervalos da concentração inibitória mínima (CIM) contra a forma planctônica de dermatófitos foram >250 µg/ml para proteinase K, de 0,0078 - 0,25 µg/ml para terbinafina e 0,125 - 0,5 µg/ml para griseofulvina. Quanto à sensibilidade dos biofilmes maduros, a proteinase K à 32 µg/ml (P <0,0001) reduziu a atividade metabólica em 39% e a biomassa em 37,62%, enquanto terbinafina à 128 µg/ml (P <0,0001) reduziu a atividade metabólica em 39,9% e a biomassa em 43,5%, já a griseofulvina à 128 µg/ml (P <0,001) reduziu a atividade metabólica em 51% e a biomassa em 53,6%. As associações da proteinase K com terbinafina ou griseofulvina apresentaram efeito sinérgico (P<0,05) frente biofilme de M. canis e T. tonsurans. As imagens da microscopia eletrônica de varredura e confocal demonstraram redução do biofilme quando tratadas com a proteinase K e quando combinados com os antifúngicos. Dessa forma, esse estudo demonstra a capacidade da proteinase K em reduzir a atividade metabólica e a biomassa de biofilmes de dermatófitos, bem como seu potencial sinérgico em associação a terbinafina e griseofulvina. |
| Abstract: | The capacity of dermatophytes to form biofilm is virulence factor that potentiate the infection. The polymeric extracellular matrix whose composition, such as protein, differs among microorganisms, provides a microenvironment capable of increasing resistance to antifungal agents. The aim of this study was the analysis of proteinase K in the matrix of mature biofilms of dermatophytes, as well as to investigate the interaction of proteinase K with terbinafine or griseofulvin. Initially, the sensitivity test of planktonic cells was performed using the broth microdilution method with 14 isolated strains of animal and human Microsporum canis (1), Trichophyton tonsurans (5), Trichophyton mentagrophytes (4), Epidermophyton floccosum (1) Trichophyton rubrum (1). Subsequently, on microplates, strains strong biofilms forms were tested with proteinase K and with antifungal agents, being evaluated by quantification of metabolic activity and biomass. Afterwards, proteinase K and terbinafine or griseofulvin were combined against biofilms of M. canis (2) and T. tonsurans (2), therefore, they were evaluated by means of metabolic activity. The biofilm architecture was analyzed by scanning and confocal electron microscopy. The minimum inhibitory concentration (MIC) ranges against the planktonic form of dermatophytes were >250 µg ml-1 for proteinase K, 0.0078 - 0.25 µg ml -1 for terbinafine, and 0.125 - 0.5 µg ml-1 for griseofulvin. As for mature biofilms, proteinase K at 32 µg ml-1 (P <0.0001) reduced metabolic activity by 39% and biomass by 37.62%, while terbinafine at 128 µg ml-1 (P < 0.0001) reduced metabolic activity by 39.9% and biomass by 43.5%, whereas griseofulvin at 128 µg ml-1 (P <0.001) reduced metabolic activity by 51% and biomass by 53.6%. The association of proteinase K with terbinafine or griseofulvin showed a synergistic effect (P<0.05) against biofilms of M. canis and T. tonsurans. Microscopy images showed reduced biofilm when treated with proteinase K and when combined with antifungal agents. Thus, this study demonstrates the ability of proteinase K to reduce the metabolic activity and biomass of dermatophyte biofilms, as well as its synergistic potential in association with terbinafine and griseofulvin. |
| URI: | http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/63987 |
| Aparece nas coleções: | DMC - Dissertações defendidas na UFC |
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