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Tipo: TCC
Título: Análise proteômica de bioespumas de Leptodactylus spp. e Physalaemus spp.
Autor(es): Bezerra, Saulo Gonçalves de Santiago
Orientador: Hissa, Denise Cavalcante
Coorientador: Melo, Vânia Maria Maciel
Palavras-chave: Ninhos de espuma;Anura;Proteoma;Proteínas surfactantes naturais
Data do documento: 2017
Citação: BEZERRA, Saulo Gonçalves de Santiago. Análise proteômica de bioespumas de Leptodactylus spp. e Physalaemus spp. 57 f. Trabalho de conclusão de curso (Graduação em Ciências Biológicas) – Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017.
Resumo: Os ninhos de espuma de anuros são bioestruturas estáveis utilizadas para a deposição e manutenção de ovos e de girinos fora da água. Esse modo reprodutivo é evolutivamente importante para a conquista do ambiente terrestre. Essas bioespumas apresentam diversas funções para o desenvolvimento da prole, como fornecimento de oxigênio e de nutrientes, proteção contra raios ultravioletas e contra predadores e aumento da taxa de crescimento. Apesar de ser um fenômeno que desperta curiosidade, pouco se conhece sobre a composição bioquímica dos mesmos. Sabe-se, atualmente, que os ninhos de espuma de anuros são formados por um coquetel de proteínas e de carboidratos, que são importantes para a arquitetura e estabilidade dessas estruturas. Dessa forma, o atual estudo teve por objetivo a caracterização bioquímica e a análise proteômica dos ninhos de espuma das espécies Leptodactylus vastus, Leptodactylus. macrosternum, Physalaemus cuvieri e Physalaemus albifrons. Os ninhos foram coletados no período chuvoso no estado do Ceará. Foram analisados o conteúdo de carboidratos e de proteínas, as atividades antimicrobiana, hemaglutinante, hemolítica, emulsificante e de redução da tensão superficial da água. A diversidade de proteínas foi analisada por SDS-PAGETricina e LC-MS/MS. As concentrações de proteínas e de carboidratos variaram, em geral, entre 1 e 2 mg/mL. Os ninhos de espuma reduziram a tensão superficial da água de 71 mN/m para, aproximadamente, 40 mN/m e obtiveram índices de emulsão acima dos 60%. As bioespumas não apresentaram atividade antimicrobiana nem hemolítica. Somente P. albifrons apresentou atividade hemaglutinante para o sangue de coelho. O gel de eletroforese demonstrou a presença de uma rica diversidade de proteínas de massas moleculares entre 10 e 150 kDa. A partir dos dados de espectrometria de massa, foi possível identificar 33, 95, 284 e 246 proteínas para o ninho de L. vastus, L. macrosternum, P. cuvieri e P. albifrons respectivamente. Somente as proteínas malato desidrogenase isoforma mitocondrial X1 e proteína bifuncional da biossíntese de purina foram comuns nos quatro ninhos. Nenhuma das proteínas que já foram isoladas a partir de bioespumas de anuros foi identificada em L. macrosternum, P. cuvieri e P. albifrons. Portanto, esses resultados fornecem novos dados sobre a composição e a evolução dos ninhos de espuma de anuros, além da possibilidade da presença de novas proteínas surfactantes.
Abstract: Frog foam nests are stable structures used for the deposition and maintenance of eggs and tadpoles outside of water. This reproductive mode is evolutionarily important for the conquest of the terrestrial environment. These biofoams present several important functions for the offspring development, such as oxygen and nutrient supply, increase of the growth rate and protection against ultraviolet rays and predators. Although it is a phenomenon that arises curiosity, little is known about its biochemical composition. Currently, it is known that frogs foam nests are formed by a cocktail of proteins and carbohydrates, which are important for the architecture and stability of this structures. Thus, the present study aimed at the biochemical characterization and proteomic analysis of the foam nests of the species Leptodactylus vastus, Leptodactylus macrosternum, Physalaemus cuvieri and Physalaemus albifrons. The nests were collected in the rainy season in the state of Ceará. The content of carbohydrate and proteins, the antimicrobial, hemagglutinating, hemolytic, emulsifying and water surface tension reduction activities were analyzed. Protein diversity was analyzed by SDS-PAGE-Tricine and LCMS/ MS. In general, protein and carbohydrate concentrations ranged from 1 to 2 mg/mL. The foam nests reduced the surface tension of water from 71 to approximately 40 mN/m and obtained emulsion indices above 60%. The biofoams showed no antimicrobial or hemolytic activity. Only, P. albifrons showed hemagglutinating activity for rabbit blood. The electrophoresis gel demonstrated the presence of a range of proteins with molecular masses between 10 to 150 kDa. From the mass spectrometry data, it was possible to identify 33, 95, 284 e 246 proteins for the nests of L. vastus, L. macrosternum, P. cuvieri and P. albifrons respectively. Only the malate dehydrogenase mitochondrial isoform X1 protein and the bifunctional purine biosynthesis protein were identified in common for the four nests. None of the proteins that have already been isolated from anuran biofoams were identified in L. macrosternum, P. cuvieri and P. albifrons. Therefore, these results provide new data on the composition and evolution of anuran foam nests, and highlights the potential of the nests for the presence of new surfactant proteins.
URI: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/61783
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