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Tipo: Tese
Título: Maturação da afinidade e seleção de novos fragmentos de anticorpos via Phage Display: considerações sobre uso de peptídeos miméticos ou células intactas
Título em inglês: Affinity maturation and selection of new antibody fragments via Phage Display: considerations on the use of mimetic peptides or intact cells
Autor(es): Bezerra, Marcus Rafael Lobo
Orientador: Furtado, Gilvan Pessoa
Palavras-chave em português: Phage display;Fragmentos de anticorpos;Sequenciamento de nova geração;Engenharia de proteínas
Palavras-chave em inglês: Phage display;Antibody fragments;Nextgeneration sequencing;Protein engineering
Data do documento: 2024
Citação: BEZERRA, Marcus Rafael Lobo. Maturação da afinidade e seleção de novos fragmentos de anticorpos via Phage Display: considerações sobre uso de peptídeos miméticos ou células intactas. 2024. Tese (Doutorado em Biotecnologia de Recursos Naturais) – Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2024.
Resumo: Câncer é um conjunto de doenças caracterizado por comportamento maligno de células do corpo, gerando metástase. Leucemias e linfomas são tipos de câncer oriundos de alterações em células do sistema imune. Anticorpos são glicoproteínas produzidas por linfócitos B e desempenham papel importante na defesa contra patógenos. Essas moléculas têm sido exploradas como imunoterápicos contra diversos alvos associados a câncer. Dois receptores expressos exclusivamente em linfócitos B vêm sendo explorados ao longo dos anos como alvos para tratamento de malignidades: CD19 e CD20. O antiCD20 rituximabe foi o primeiro anticorpo aprovado para imunoterapia do câncer. Apesar de seu sucesso terapêutico, alguns pacientes não respondem bem ao tratamento. Já o CD19 vem sendo explorado em outros tipos de imunoterapia, como células CAR-T e moléculas bispecíficas. A técnica de phage display foi utilizada para explorar metodologias para maturar a afinidade do anticorpo rituximabe contra o alvo e para desenvolver novos anticorpos anti-CD19, utilizando técnica de sequenciamento de nova geração para propor candidatos. Para o alvo CD20, foi utilizado peptídeo mimótopo do CD20 e foram propostas três moléculas candidatas. Apenas uma delas foi expressa com sucesso em sistema bacteriano e, apesar de ter alto enriquecimento na seleção por phage display utilizando o peptídeo como alvo, esta molécula perdeu a capacidade de ligação a células CD20+, sugerindo a complexa interação com rituximabe. Um mutante foi expresso em sistema eucarioto e sua interação com células CD20+ foi observada por citometria de fluxo, bem como a provável indução de atividade citotóxica. Já para o alvo CD19, apenas duas moléculas foram testadas, apresentando baixa marcação a células intactas. Como perspectiva, novas combinações de cadeia VH e VL já foram desenhadas e novos testes serão realizados visando a obtenção de moléculas funcionais. A estratégia utilizada gerou candidatos baseado apenas no enriquecimento de sequências através das etapas de seleção por phage display. As moléculas também podem ser estudas no formato FvFc, contendo porção constante, para avaliar suas propriedades efetoras.
Abstract: Cancer is a group of diseases characterized by the malignant behavior of cells in the body, leading to metastasis. Leukemias and lymphomas are types of cancer originating from alterations in immune system cells. Antibodies are glycoproteins produced by B lymphocytes and play an important role in defense against pathogens. These molecules have been explored as immunotherapeutics against various cancer-associated targets. Two receptors exclusively expressed in B lymphocytes have been investigated over the years as targets for malignancy treatment: CD19 and CD20. The anti-CD20 rituximab was the first antibody approved for cancer immunotherapy. Despite its therapeutic success, some patients do not respond well to the treatment. CD19, on the other hand, has been explored in other immunotherapies, such as CAR-T cells and bispecific molecules. The phage display technique was used to explore methodologies to mature the affinity of rituximab antibody against the target and to develop new anti-CD19 antibodies, using nextgeneration sequencing techniques to propose candidates. For the CD20 target, a CD20 mimotope peptide was used, and three candidate molecules were proposed. Only one of them was successfully expressed in a bacterial system and, despite high enrichment in phage display selection, this molecule lost its binding capacity to CD20+ cells, suggesting a complex interaction with rituximab. One mutant was expressed in a eukaryotic system, and binding to CD20+ cells was observed by flow cytometry, as well as a likely cytotoxic activity against Raji cells. For the CD19 target, only two molecules were tested, showing low binding. In the future, new combinations of VH and VL chains and testing of other candidates will be conducted to obtain functional molecules. The strategy used generated candidates based solely on sequence enrichment through phage display selection steps. The molecules can also be studied in the FvFc format, containing a constant portion, to assess their effector properties.
URI: http://repositorio.ufc.br/handle/riufc/78391
ORCID do(s) Autor(es): https://orcid.org/0000-0002-9857-9676
Currículo Lattes do(s) Autor(es): http://lattes.cnpq.br/6611745292929739
ORCID do Orientador: https://orcid.org/0000-0002-8797-7783
Currículo Lattes do Orientador: http://lattes.cnpq.br/4259673144880085
Tipo de Acesso: Acesso Aberto
Aparece nas coleções:PPGBRN - Teses defendidas na UFC

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