Metodologia não-destrutiva de extração de DNA a partir da semente do cajueiro e diversidade genética de acessos de cajueiro do Cerrado

Abstract

A etapa de caracterização de acessos é de fundamental importância tanto na avaliação de uma coleção de germoplasma quanto para um programa de melhoramento genético. Para realização da etapa de caracterização, seja morfológica ou molecular, necessita-se de plantas no campo para observar aspectos da planta em geral ou coletar folhas para extração de DNA, o que demanda maior tempo e custo do processo. Por outro lado, a extração de DNA realizada diretamente na semente permite que o genoma seja acessado sem a necessidade do plantio de todas as sementes, acelerando a escolha de genótipos de interesse e informações sobre a variabilidade genética. Nesse sentido, objetivou-se com esse trabalho desenvolver uma metodologia não-destrutiva de extração de DNA a partir da semente de caju e avaliar a diversidade genética de acessos de cajueiro do Cerrado. Para tanto, o trabalho foi dividido em dois capítulos. No capítulo 1, as sementes foram perfuradas mecanicamente com uma mini retífica, sendo retirada uma amostra do endosperma de cada semente. Para a extração de DNA, foram testados diferentes protocolos e kits comerciais, assim como materiais para selar a abertura feita na semente. Em conclusão, foi possível extrair DNA de cajueiro a partir do endosperma, utilizando, preferencialmente, kits comerciais de extração e cimento cola como material selante para posterior plantio. No capítulo 2, a variabilidade genética de acessos de cajueiro do cerrado foi avaliada de duas maneiras. Uma delas foi por meio da biometria das sementes de sete acessos. Para isso, os dados foram submetidos à análise de variância e as médias comparadas pelo critério de Scott-Knott (p < 0,05) e a importância dos caracteres foi feita com base no método de Singh. Utilizando a distância generalizada de Mahanalobis (D2), foi realizado a análise de agrupamento pelo método UPGMA e o de otimização de Tocher. A outra maneira foi utilizando-se marcadores moleculares RAPD e ISSR para um dos acessos. Para isso, as matrizes de distâncias genéticas foram construídas pelo complemento aritmético do coeficiente de Jaccard, obtidas dos dados binários gerados das bandas dos marcadores moleculares. A partir das matrizes de dissimilaridade foi realizada a análise de agrupamento pelo método UPGMA e o de otimização de Tocher. Os resultados biométricos e moleculares indicam variabilidade genética entre e dentro dos acessos. Os métodos de biometria e de marcadores moleculares baseados em RAPD e ISSR são eficazes em identificar variabilidade entre sementes de cajueiro do Cerrado.