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http://repositorio.ufc.br/handle/riufc/56507| Tipo: | Dissertação |
| Título: | Avaliação in vitro da atividade antifúngica do midazolam frente a isolados de Candida spp. resistentes ao fluconazol, sua atividade contra biofilme formado e investigação do provável mecanismo de ação |
| Autor(es): | Holanda, Maria Aryadine Venancio |
| Orientador: | Nobre Júnior, Hélio Vitoriano |
| Palavras-chave: | Midazolam;Biofilmes;Reposicionamento de Medicamentos;Candida |
| Data do documento: | 2020 |
| Citação: | HOLANDA, M. A. V. Avaliação in vitro da atividade antifúngica do midazolam frente a isolados de Candida spp. resistentes ao fluconazol, sua atividade contra biofilme formado e investigação do provável mecanismo de ação. 2020. 84 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2020. |
| Resumo: | A ocorrência da candidíase invasiva em hospitais terciários vem aumentando significativamente nas últimas décadas, abrangendo aproximadamente 80% das infecções fúngicas nosocomiais. Um dos fatores que contribuem com essa porcentagem é o aparecimento de resistência aos antifúngicos, que pode ser influenciada pela capacidade que algumas espécies de Candida spp. apresentam de formar biofilmes e também pelo reduzido arsenal terapêutico, busca-se novas alternativas que visem driblar essa limitação. O objetivo do trabalho foi avaliar a atividade antifúngica do midazolam isolado e em associação com azólicos frente a isolados clínicos de Candida spp. resistentes ao fluconazol na forma planctônica e em biofilme. Utilizou-se a técnica de microdiluição em caldo, descrita pelo Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI, M27-A3), com o intuito de determinar a Concentração Inibitória Mínima (CIM). Realizou-se também ensaios de citometria de fluxo para a investigação do provável mecanismo de ação, avaliação de dano ao DNA pelo ensaio do cometa e teste de citotoxicidade na linhagem L929 de fibroblastos murino. O midazolam apresentou CIM que variou de 125 a 250 μg/mL. O midazolam não demonstrou citotoxicidade quando avaliada nas concentrações de 31,5 a 500 μg/mL. Apresentou redução significativa da viabilidade celular do biofilme de Candida albicans em 500 μg/mL, de Candida tropicalis em 1000 μg/mL e de Candida parapsilosis em 125 μg/mL. Verificou-se também que o midazolam promove diminuição da densidade celular, danos na membrana mitocondrial e que propiciou externalização da fosfatidilserina, mas não foi capaz de produzir espécies reativas de oxigênio e causar danos ao DNA. Observou-se também a interação do midazolam e do biofilme de Candida spp. através da microscopia eletrônica de varredura (MEV), onde as células tratadas apresentaram alteração em sua aparência, o que pode ter sido ocasionado pela perda da rigidez da parede celular fúngica. Portanto, o midazolam mostrou-se como potencial antifúngico frente aos isolados testados nesse estudo. |
| Abstract: | The occurence of invasive candidiasis in tertiary hospitals has increased significantly in recent decades, covering approximately 80% of nosocomial fungal infections. One of the factors that contribute to this percentage is the appearance of the resistance to antifungals, which can be influenced by the ability of some species of Candida spp. to form biofilms and also by the reduced therapeutic arsenal, makes it necessary to search for new alternatives to overcome this limitation. The objective of the work was to evaluate the antifungal activity of midazolam isolated and in association with azolics in relation to clinical isolates of Candida spp. resistant to fluconazole in planktonic form and in biofilm. The microdilution broth technique described by the Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI, M27-A3) was used to determine the Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Flow cytometry tests were also performed to investigate the probable mechanism of action, evaluation of DNA damage by the comet test and cytotoxicity test on L929 murine fibroblasts. Midazolam showed MIC ranging from 125 to 250 μg/mL. Midazolam showed no cytotoxicity when evaluated at concentrations of 31.5 to 500 μg/mL. It showed significant reduction in cellular viability of Candida albicans biofilm by 500 μg/mL, Candida tropicalis by 1000 μg/mL and Candida parapsilosis by 125 μg/mL. It was also found that midazolam promotes decreased cell density, damage to the mitochondrial membrane and that it provided phosphatidylserine externalization but was not able to produce reactive oxygen species and cause DNA damage. The interaction of midazolam and Candida spp. biofilm was also observed through scanning electron microscopy (SEM), where the treated cells presented alteration in their appearance, which may have been caused by the loss of rigidity of the fungal cell wall. Therefore, midazolam proved to be an antifungal potential against the isolates tested in this study. |
| URI: | http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/56507 |
| Aparece nas coleções: | PPGMM - Dissertações defendidas na UFC |
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