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http://repositorio.ufc.br/handle/riufc/52838| Tipo: | Dissertação |
| Título: | Desenvolvimento e avaliação de lipossomas contendo a naftoquinona sintética ENSJ39: estudos in vitro e in vivo |
| Título em inglês: | Development and evaluation of liposomes containing synthetic naphthoquinone ensj39: in vitro and in vivo studies |
| Autor(es): | Rebouças, Luciana de Vasconcelos |
| Orientador: | Pessoa, Claudia do Ó |
| Coorientador: | Oliveira, Fátima de Cássia Evangelista de |
| Palavras-chave: | Neoplasias;Lipossomas;Nanotecnologia;Quinonas |
| Data do documento: | 24-Jun-2020 |
| Citação: | REBOUÇAS, L. V. Desenvolvimento e avaliação de lipossomas contendo a naftoquinona sintética ENSJ39: estudos in vitro e in vivo. 2020. 110 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2020. |
| Resumo: | O câncer é um problema de saúde pública mundial, caracterizando-se pela proliferação descontrolada de células. A nanotecnologia vem ganhando destaque por amenizar os efeitos colaterais dos tratamentos quimioterápicos convencionais, por meio de sistemas nanoparticulados que permitem maior biodistribuição, biodisponibilidade, sítio-especificidade, menor toxicidade, além de reduzir a resistência e melhorar a eficácia terapêutica. Com isso, o objetivo do presente estudo foi encapsular a naftoquinona sintética ENSJ39, composto de alta atividade citotóxica in vitro, porém com característica hidrofóbica, em um sistema lipossomal, bem como caracterizá-los e avaliar sua atividade biológica in vitro e in vivo. Para isso, os lipossomas foram obtidos por método de hidratação do filme lipídico e passaram por caracterizações fisico-químicas (análise termogravimétrica, calorimetria exploratória diferencial, técnica de espalhamento dinâmico da luz e microscopia de força atômica), avaliação da eficiência de encapsulação e estudos de estabilidade que incluíram simulação das condições de transporte e estocagem. Foram realizados também teste de citotoxicidade in vitro por MTT, ensaio de exclusão por azul de Tripan e avaliação de alterações morfológicas em linhagem tumoral. Posteriormente, os lipossomas foram avaliados in vivo, quanto a toxicidade aguda, e foi verificado a DL50 da ENSJ39 pelo método Up and Down. Os lipossomas contendo ENSJ39 apresentaram alta taxa de encapsulamento (82,3% ± 0,04), tamanho médio de 31 nm (± 5,81), potencial zeta de +53,5 mV e índice de polidispersão de 0,24. Até 250° C, as nanopartículas mostraram-se termicamente estáveis conseguindo preservar a perda de massa de fármaco livre, e após 4 meses de estocagem mantiveram boas características físico-químicas. Os valores de CI50 do fármaco encapsulado não apresentaram diferença estatística significativa quando comparado ao fármaco livre e na avaliação morfológica em HCT-116 (colorretal), após 72 h de tratamento, a LE39 provocou tumefação e intensa vacuolização citoplasmática, além de ter promovido o aumento número de células não viáveis, semelhante a ENSJ39, quando comparado aos controles negativo e positivo (doxorrubicina). A DL50 do composto livre não foi definida por conta da baixa solubilidade, porém, a maior dose testada (175 mg/kg) não causou morte dos animais. Ambas as doses avaliadas (55 e 175 mg/kg) da ENSJ39 livre e encapsulada, no teste de toxicidade aguda, não ocasionaram alterações de peso, de comportamento, de parâmetros bioquímicos renais, hepáticos e de parâmetros hematológicas. Todavia, o estudo histopatológico renal evidenciou alterações nos animais que receberam o fármaco livre tanto via oral (55 mg/kg) quanto via intraperitoneal (55 e 175 mg/kg). Conclui-se que o método de encapsulamento da ENSJ39 foi eficaz na obtenção de lipossomas estáveis, foi capaz de melhorar a dispersão desse composto em veículo aquoso, e conseguiu prevenir danos ao tecido renal de camundongos em comparação ao fármaco não encapsulado. |
| Abstract: | Cancer is a public health problem in world, characterized by uncontrolled cell proliferation. Nanotechnology is gaining prominence for mitigating the side effects of conventional chemotherapy treatments and for developing nanoparticulate systems that allow greater biodistribution, bioavailability, site-specificity, less toxicity, reduces resistance, and improves therapeutic efficacy. This study aimed to encapsulate the synthetic naphthoquinone ENSJ39 (a compound with high cytotoxic activity in vitro, but with hydrophobic characteristic) in liposomes, characterize them and evaluate their biological activity in vitro and in vivo. Liposomes were obtained by hydration method of the lipid film and subjected to physico-chemical characterizations (thermogravimetric analysis, differential exploratory calorimetry, dynamic light scattering technique and atomic force microscopy), evaluation of the encapsulation efficiency and studies of stability that included simulation transport and storage conditions. In vitro cytotoxicity test by MTT, Trypan blue exclusion assay and evaluation of morphological changes in tumor lineage were also analised. Subsequently, the liposomes were evaluated in vivo for acute toxicity and the LD50 of ENSJ39 was verified by the Up and Down method. Liposomes containing ENSJ39 showed a high encapsulation rate (82.3% ± 0.04), average size of 31 (± 5.81) nm, a zeta potential of +53.5 mV and a polydispersity index of 0.24. Up to 250° C, the liposomes were thermally stable, able to preserve the loss of mass of the free drug, and after 4 months of storage they maintained good physical-chemical characteristics. The IC50 values of the encapsulated drug showed no statistically significant difference when compared to free drug and the morphological evaluation in HCT-116 (colorectal), after 72 hours of treatment, showed the LE39 caused swelling and intense cytoplasmic vacuolization, in addition to promoting an increase in number of non-viable cells, similar to ENSJ39, when compared to negative and positive controls (doxorubicin). LD50 of the free compound was not defined due to the poor solubility, however, the highest dose tested (175 mg/kg) did not cause death of the animals. Both doses evaluated (55 and 175 mg/kg) of ENSJ39 and its encapsulated form, in acute toxicity test, did not cause changes in weight, behavior, renal biochemical, hepatic and hematological parameters. However, renal histopathological study showed changes in the animals that received the free drug via oral (55 mg/kg) and intraperitoneal (55 and 175 mg/kg). In conclusion, ENSJ39 encapsulation method was effective in obtaining stable liposomes, was able to improve the dispersion of this compound in an aqueous vehicle and was able to prevent damage to the renal tissue of mice compared to the free drug. |
| URI: | http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/52838 |
| Aparece nas coleções: | PPGF - Dissertações defendidas na UFC |
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