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dc.contributor.advisorMartins, Alice Maria Costa-
dc.contributor.authorTorres, Alba Fabíola Costa-
dc.date.accessioned2020-02-28T16:49:55Z-
dc.date.available2020-02-28T16:49:55Z-
dc.date.issued2013-
dc.identifier.citationTORRES, A. F. C. Peçonha de Dinoponera quadriceps como fonte de substâncias bioativas uma abordagem transcriptomica e peptidomica. 2013. 148 f. Tese (Doutorado em Desenvolvimento e Inovação Tecnológica em Medicamentos) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013.pt_BR
dc.identifier.urihttp://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/50377-
dc.description.abstractDinoponera quadriceps is a predatory giant ant that inhabits the tropical regions and subdues its prey (insects) with stings that deliver a toxic cocktail of molecules. Human accidents occasionally occur and cause local inflammation, pain and systemic symptoms. A comprehensive study of the D. quadriceps venom gland transcriptome is required to advance our knowledge about the toxin repertoire of the giant ant venom to evaluate the presence of substances with biotechnological value and to understand the physiopathological basis of Hymenoptera envenomation. We conducted a transcriptome analysis of a cDNA library from the D. quadriceps venom gland with Sanger sequencing in combination with whole-transcriptome shotgun deep sequencing. From the cDNA library using Sanger methodology, a total of 420 independent clones were analyzed resulting in 21 contigs and 39 singlets. Although the proportion of dinoponeratoxin isoform precursors was high, the first giant ant venom inhibitor cysteine-knot (ICK) toxin was found. The deep next generation sequencing yielded a total of 2.514.767 raw reads that were assembled into 18.546 contigs. A Blast search of the assembled contigs against non-redundant and Swiss-Prot databases showed that 73,27% of transcripts from NGS and 71% from Sanger corresponded to hits and indicated an interesting diversity of transcripts related to venom gene expression. The majority of these venom-related sequences code for a major polypeptide core, which comprises venom allergens, lethal-like proteins and esterases, and a minor peptide framework composed of inter-specific structurally conserved cysteine-rich toxins. Both cDNA library and deep sequencing yielded large proportions of contigs that showed no similarities with known sequences or were classified as hypotethical proteins.To improve the investigation, we performed a proteomic analysis with the crude venom of D. quadriceps. It was possible to confirm the presence of mature toxins evidenced through the transcriptome and predict the precursors processing and post-translational modifications. To our knowledge, this is the first report of the venom gland transcriptome of the New World giant ant D. quadriceps. The glandular venom system was dissected, and the toxin arsenal was revealed; this process brought to light novel sequences that included an ICK-folded toxins, allergen proteins, esterases. These findings contribute to the understanding the venom constituints the ecology, behavior and venomics of hymenopterans.pt_BR
dc.language.isopt_BRpt_BR
dc.subjectVenenos de Formigapt_BR
dc.subjectTranscriptomapt_BR
dc.subjectPeptídeo Cpt_BR
dc.titlePeçonha de Dinoponera quadriceps como fonte de substâncias bioativas : uma abordagem transcriptomica e peptidomicapt_BR
dc.typeTesept_BR
dc.description.abstract-ptbrDinoponera quadriceps é uma formiga gigante, predatória que habita regiões topicais e submete suas presas injetando um coquetel de substâncias tóxicas. Acidentes em humanos ocorrem ocasionalmente, e podem causar dor e inflamação local, além de sintomas sistêmicos. O estudo detalhado do transcriptoma da glândula de veneno de D. quadriceps é requerido para esclarecer sobre o repertório de toxinas que possui, com objetivo de avaliar o potencial biotecnológico destas substâncias, assim como compreender as bases fisiopatológicas do envenenamento por Himenópteros. Realizou-se a análise transcriptômica da biblioteca de cDNA da glândula de veneno de D. quadriceps através de sequenciamento pelo método Sanger em combinação com sequenciamento utilizando a tecnologia Ion Torrent. A partir da biblioteca de cDNA, 420 clones independentes foram analisados, resultando em 21 contigs e 39 singletos. Embora a proporção de dinoponeratoxinas tenha sido bastante elevada, foi possível descrever a primeira toxina ICK-símile de formiga. Através do sequenciamento Ion Torrent um total de 2.514.767 leituras foi alcançado. Estas foram agrupadas em 18.546 contigs. A avaliação dos contigs e singletos utilizando a ferramenta Blast contra banco de dados de proteínas não redundantes e Swiss-Prot mostrou que 73,27% dos transcritos obtidos por NGS e 71% dos obtidos por Sanger apresentaram homólogos, indicando uma interessante diversidade de transcritos relacionados à expressão gênica dos constituintes da peçonha. A maioria das sequências codificam um conjunto de polipeptídios mais abundantes, os quais compreendem substâncias alergênicas, proteínas letais e esterases; e um conjunto de polipeptídios menos abundantes como toxinas estruturalmente conservadas ricas em cisteínas. Uma elevada proporção de transcritos, sejam obtidos pelo método Sanger ou àqueles obtidos pelo método Ion Torrent, foram classificados como proteínas hipotéticas ou não encontrou-se homólogos com sequências conhecidas, não sendo possível categorizá-los. Para complementar a investigação realizou-se a análise peptidômica da peçonha bruta de D. quadriceps, através da qual foi possível comparar peptídeos presentes na peçonha com as sequencias de transcritos. Assim, foi possível confirmar a presença de toxinas maduras, cujos precursores foram revelados através da análise transcriptômica, bem como foi possível predizer a forma de processamento dos precursores dos transcritos e modificações pós-traducionais. Este é o primeiro relato do transcriptoma da glândula de veneno da formiga gigante D. quadriceps. O sistema glandular foi dissecado e o repertório de toxinas revelado, trazendo à luz novas sequências que incluem toxinas ICK-símile, proteínas alergênicas, esterases, etc. Estes achados contribuem para a compreensão da ecologia, do comportamento e principalmente da venômica de Himenópteros.pt_BR
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