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Title in Portuguese: Diversidade de Candida spp. isoladas de solos de área cultivada na presença de agrotóxicos e da mata nativa adjacente: sensibilidade planctônica e de biofilmes
Title: Diversity of Candida spp. isolated from soils of cultivated area in the presence of pesticides and adjacent native forest: planktonic sensitivity and biofilms
Author: Maria, Gerlane Luziana de
Advisor(s): Rocha, Marcos Fábio Gadelha
Co-advisor(s): Brilhante, Raimunda Sâmia Nogueira
Keywords: Fermento Seco
Testes de Sensibilidade Microbiana
Biofilmes
Issue Date: 29-Jan-2020
Citation: MARIA, G. L. Diversidade de Candida spp. isoladas de solos de área cultivada na presença de agrotóxicos e da mata nativa adjacente: sensibilidade planctônica e de biofilmes. 2020. 61 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2020.
Abstract in Portuguese: Áreas de mata nativa, em virtude da demanda populacional, estão sendo destinadas aos diversos sistemas de cultivo. E para atender e manter a produtividade nas áreas agrícolas tem se intensificado o uso de agrotóxicos. Dentre esses agrotóxicos, estão os antifúngicos, em especial os derivados azólicos, que são amplamente utilizados devido ao baixo custo e ao amplo espectro de ação. Estes produtos podem causar impactos negativos no meio ambiente, levando a contaminação do solo e ao impacto na microbiota. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi identificar Candida spp. isoladas de solos de área cultivada com aplicação de agrotóxicos e da mata nativa adjacente, assim como investigar a sensibilidade planctônica e de biofilmes dessas leveduras a antifúngicos clínicos e agrícolas. Para isso, os isolados foram identificados por testes fenotípicos, bioquímicos e moleculares. As concentrações inibitórias mínimas (CIMs) de fluconazol, itraconazol, voriconazol, anfotericina B e dos antifúngicos agrícolas, tetraconazol e tebuconazol, foram determinadas pelo método de microdiluição em caldo. A sensibilidade do biofilme a voriconazol, tetraconazol e tebuconazol foi avaliada através do ensaio de redução de XTT. Assim, no solo cultivado foram identificadas 24 cepas, sendo 14 C. parapsilosis stricto sensu, 5 C. albicans, 2 C. tropicalis, 1 C. fermentati e 2 C. metapsilosis, enquanto no solo da mata nativa foram identificadas 22 cepas, sendo 12 C. parapsilosis stricto sensu, 5 C. albicans, 1 C. tropicalis, 3 C. fermentati e 1 C. orthopsilosis. Os intervalos das CIMs para anfotericina B, azólicos clínicos e agrícolas foram de ≤0,03 a 0,5 µg/mL, ≤0,03 a 4 µg/mL e 1 a 128 µg/mL, respectivamente. Todas as cepas, independente da área de isolamento, foram classificadas em moderada ou forte formadoras de biofilmes. Os intervalos das concentrações inibitórias mínimas dos biofilmes (CIMB50) para voriconazol, tetraconazol e tebuconazol foram encontrados em 3/21, 10/21 e 10/21 cepas, respectivamente, com intervalos de 128 a 1024 µg/mL. Em síntese, o solo apresenta uma diversidade de leveduras do gênero Candida, com destaque para o complexo C. parapsilosis. Ademais, uma cepa de C. parapsilosis stricto sensu foi resistente ao itraconazol e seis cepas de C. albicans e uma cepa de C. parapsilosis stricto sensu apresentaram trailing para os azólicos clínicos. Todas as leveduras apresentaram elevado potencial à formação de biofilmes que, no geral, se mantiveram menos tolerantes aos antifúngicos agrícolas tetraconazol e tebuconazol, quando comparados ao voriconazol.
Abstract: The native forest areas are exposed to various cultivation systems due to population demand. The use of pesticides has intensified to maintain productivity in agricultural areas. Among these pesticides are antifungals drugs, especially azole derivatives, which are widely used due to their low cost and broad spectrum. These products can impact the environment, leading to soil contamination and impacting the microbiota. Therefore, the aim was to identify Candida spp. isolated from soils of cultivated area with pesticides application and adjacent native forest, as well as to investigate the planktonic and biofilm susceptibility of these yeasts to clinical and agricultural antifungals. For this, the isolates were identified by phenotypic, biochemical and molecular assays. The minimum inhibitory concentrations (MICs) of fluconazole, itraconazole, voriconazole, amphotericin B and agricultural antifungals tetraconazole and tebuconazole were determined by the broth microdilution method. The biofilm susceptibility to voriconazole, tetraconazole and tebuconazole was assessed by the XTT reduction assay. Thus, 24 strains were identified in the cultivated soil, wich were 14 C. parapsilosis sensu stricto, 5 C. albicans, 2 C. tropicalis, 1 C. fermentati and 2 C. metapsilosis. On the other hand, 22 strains were identified in native forest soil, wich were 12 C. parapsilosis sensu stricto, 5 C. albicans, 1 C. tropicalis, 3 C. fermentati and 1 C. orthopsilosis. The amphotericin B MICs and clinical and agricultural azole MICs ranged from ≤0.03 to 0.5 µg/mL, ≤0.03 to 4 µg/mL and 1 to 128 µg/mL, respectively. All strains were classified as moderate or strong biofilm-forming regardless of isolation area. The minimum inhibitory biofilm concentration (BMICs50) for voriconazole, tetraconazole and tebuconazole were found in 3/21, 10/21 and 10/21 strains, respectively, with ranged from 128 to 1024 µg/mL. In summary, the soil has a diversity of Candida spp., especially the C. parapsilosis complex. In addition one strain of C. parapsilosis sensu stricto was resistant to itraconazole and six strains of C. albicans and one strains of C. parapsilosis sensu stricto presented trailing to the azolics. All yeasts presented high potential for biofilm formation. Finally, these biofilms remained less tolerant to the agricultural antifungals tetraconazole and tebuconazole when compared to voriconazole.
URI: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/50539
metadata.dc.type: Dissertação
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