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Título: Diagnóstico molecular e detecção de genes de virulência de Campylobacter jejuni em crianças com diarreia moderada a severa na cidade de Fortaleza – CE, Brasil.
Título em inglês: Molecular diagnosis and detection of Campylobacter jejuni virulence genes in children with moderate to severe diarrhea in the city of Fortaleza - CE, Brazil.
Autor(es): Veras, Herlice do Nascimento
Orientador(es): Lima, Aldo Ângelo Moreira
Palavras-chave: Campylobacter jejuni
Virulência
Diarreia
Data do documento: 22-Jul-2016
Citação: VERAS, H. N.; LIMA, A. A. M. (2016)
Resumo: Infecções porCampylobacter spp. são consideradasuma das causas mais comuns de gastroenterite ocasionada porcontaminação de água e alimentos. Campylobacter jejuni é a espécie mais bem caracterizada, e a investigação da epidemiologia, e dos genes de virulência, podem elucidar algum aspecto da patogenicidade deste micro-organismo. O objetivo desse estudo foi diagnosticar e identificar a presença de genes de virulência relacionados à Campylobacter jejuni em crianças com diarreia moderada a severa na cidade de Fortaleza – CE, Brasil. Este estudo faz parte de um projeto intitulado “Diarrhea Enteric Card (DEC)”, que teve como objetivo desenvolver um ensaio de PCR multiplex para o diagnóstico de bactérias patogênicas. O projeto teve aprovação nos comitês de ética local e nacional no Brasil (HIAS 80/06 e CONEPE 13523/2007, respectivamente). A extração de DNA foi realizada diretamente das amostras fecais oriundas de 436 criançascom diarreia moderada a severa, durantes os meses de maio de 2008 a abril de 2009, na cidade de Fortaleza, Ceará, Brasil. O diagnóstico de C. jejuni foi realizado através de PCR convencional, utilizando o gene hipO. A detecção dos genes de virulência de C. jejuni foi realizada através das técnicas de PCR uniplex e multiplex. C. jejuni foi diagnóstico em 14% (61/436) das amostras, apresentando associação significante da presença do patógeno em crianças com idade entre 0-12 meses (P=0,0001) e com idade entre 12,1-24 meses (P=0,0427). A detecção dos genes de virulência foi realizada em 51 amostras positivas para a C. jejuni.A prevalência dos genes associados à virulência de C. jejuni foram detectados seguindo a proporção de amostras positivas:flgE, (92,2%, 47/51) eflaA, (76.5%, 39/51), relacionados à motilidade;cheW (90,2%, 46/51); cheA, (82,4%, 42/51) echeR,(66,6%, 34/51), relacionados à quimiotaxia bacteriana; cadF, (100%, 51/51) ejlpA, (43,1%, 22/51), relacionados à adesão; ciaB, (96,1%, 49/51); iamA, (90,2%, 46/51); pldA, (45,1, 23/51) epVir (0%, 0/51), relacionados a invasão; cdtABC, (94,1%, 48/51), relacionados à toxina citoletal distensora (CDT); fur, (66,6%, 34/51); cfrA, (31,4%, 16/51) eceuE, (21,7%, 11/51), relacionados ao transporte e regulação de ferro; racR, (100%, 51/51),sodB, (96,1%, 49/51),dnaJ, (88,2%, 45/51) ekatA, (66,6%, 34/51), relacionado à sobrevivência da bactéria e ao estresse oxidativo. A distribuição dos perfis de genes de virulência de C. jejuni não correspondeu com o parâmetro clínico de dor abdominal, mas houve a associação dos genescfrA e dnaJ com a presença de febre (P=0,0214), dos genes jlpA e katA com a presença de vômito (P=0,0211), e dos genespldA e ceuE com a presença de sangue nas fezes(P= 0,0013), sugerindo que essas relações poderiam estar associadas a severidade da infecção causada pelo micro-organismo. Novos estudos sobre a expressão de proteínas relacionadas aos genes de virulência devem ser realizados, para que assim haja uma melhor compreensão sobre os mecanismos da patobiologia das infecções causadas porC. jejuni.
Abstract: Campylobacter spp. infections are considered one of the most common causes of bacterial gastroenteritis caused by contamination of water and food. Campylobacter jejuni is the most characterized specie, and the investigation of the epidemiology and virulence genes can elucidate some aspects of the microorganism pathogenicity. The aim of this study was to diagnose and identify the presence of virulence genes related to Campylobacter jejuni in children with moderate to severe diarrhea in the city of Fortaleza – CE, Brazil. This work is part of a project entitled “Diarrhea Enteric Card (DEC)”, which goal is to develop PCR-based multiplex diagnostic assays for bacterial enteric pathogens. That project was approved by the local and national ethical committees in Brazil (HIAS 80/06 and CONEPE 13523/2007, respectively). DNA was extracted directly from fecal samples isolated from 436 childrenwith moderate to severe diarrhea from May 2008 to April 2009, in Fortaleza, Ceará, Brazil. The diagnosis of C. jejuni was performed by conventional PCR using hipO gene. The detection of genes that encode proteins associated with virulence of C.jejuni was performed by uniplex and multiplex PCR techniques. C. jejuni was diagnosed in 14% (61/436) of the samples, presenting significant association among children aged 0-12 months (P = 0.0001) and children aged 12, 1-24 months. 51 positive samples for C. jejuniwere used for the detection of the virulence genes. The prevalence of theC. jejuni’s virulence-associated genes were detected in the following proportions of C. jejuni-positive DNA samples: flgE, (92.2%, 47/51) and flaA, (76.5%, 39/51), related to motility;cheW, (90.2%, 46/51); (cheA, 82.4%, 42/51) andcheR, (66.6%, 34/51), related to bacterial chemiotaxis; cadF, (100%, 51/51) andjlpA, (43.1%, 22/51), related to bacterial adhesion; ciaB, (96.1%, 49/51); iamA, (90.2%, 46/51); pldA, (45.1%, 23/51) and pVir(0%, 0/51), related to invasion; cdtABC, (94.1%, 48/51), related to cytolethal distending toxin (CDT); fur, (66.6%, 34/51); cfrA, (31.4%, 16/51) and ceuE, (21.7%, 11/51), related to bacterial iron transport and regulation; racR, (100%, 51/51); sodB, (96.1%, 49/51); dnaJ, (88.2%, 45/51) andkatA, (66.6%, 34/51), related to oxidative stress. The distribution profiles of C. jejuni’s virulence did not correspond to the patient’s clinical presentation of abdominal pain. But the presence of cfrA and dnaJ genes was correlated with fever (P=0,0214)and the presence of jlpA e katA gene were correlated with vomiting (P=0,0211) and pldA and ceuE genes was correlated with the presence of blood in stool (P=0,0013), this data suggests that relationships might be related to the severity of infection by this microorganism. New studies about the expression of proteins associated with the virulence genes must be carried out to better understand the pathobiology mechanisms of Campylobacter jejuni infections.
Descrição: VERAS, H. N. Diagnóstico molecular e detecção de genes de virulência de Campylobacter jejuni em crianças com diarreia moderada a severa na cidade de Fortaleza – CE, Brasil. 2016 .129 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016.
URI: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/23695
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