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Title in Portuguese: Efeito imunomodulador de CXCL10 na infecção de macrófagos murinos por cepa de Leishmania braziliensis isolada de paciente refratário ao tratamento com antimônio
Title: Immunomodulatory effect of CXCL10 in infected murine macrophages by Leishmania braziliensis isolated from a patient with an antimonium refractory therapy
Author: Rodrigues, Naya Lúcia de Castro
Advisor(s): Queiroz , José Ajax Nogueira
Co-advisor(s): Teixeira, Maria Jania
Keywords: Leishmania braziliensis
Citocinas
Quimiocinas
Issue Date: 2015
Citation: RODRIGUES, N. L. C. Efeito imunomodulador de CXCL10 na infecção de macrófagos murinos por cepa de Leishmania braziliensis isolada de paciente refratário ao tratamento com antimônio. 2015. 70 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015.
Abstract in Portuguese: A quimioterapia disponível para as leishmanioses é eficaz em muitos casos, contudo ainda não é satisfatória, apresentando várias inconveniências, uma delas, a resistência aos antimoniais, que é um dos grandes problemas atuais. Poucos estudos utilizando tratamento com quimiocinas recombinantes para as leishmanioses têm sido relatados. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito imunomodulador in vitro de CXCL10 e sua associação com Glucantime na infecção de macrófagos por cepa de Leishmania braziliensis refratária ao tratamento com antimônio. Para isso, macrófagos murinos foram infectados com L. braziliensis e tratados ou não com CXCL10 (25, 50 e 100ng/mL), Glucantime (32mg/mL) e CXCL10+Glucantime [(25, 50 e 100ng/mL) + (32mg/mL)]. Após 24 e 48h de infecção, avaliou-se: carga parasitária (contagem de macrófagos infectados em lamínulas coradas), concentração de óxido nítrico (NO) e o padrão da citocinas TNF-α, IL-12, IL-4, IL-10 e TGF-β nos sobrenadantes das culturas. Os resultados mostraram que os tratamentos com CXCL10 e a associação CXCL10+Glucantime resultaram em uma significante redução da carga parasitária, variando entre 70,5% a 95% e 92,4% a 95,0%, respectivamente, quando comparado com o controle não tratado, enquanto o tratamento com Glucantime apresentou redução da infecção dos macrófagos de 74,0%. A redução da carga parasitária foi correlacionada com o aumento de NO em todas as concentrações de CXCL10 (p< 0,001). No entanto, não foi observada a mesma dinâmica quando utilizado a associação CXCL10+Glucantime. Os níveis de TNF-α e IL-12 aumentaram em função da concentração de CXCL10 nas primeiras 24h, no entanto, foi inibida quando os macrófagos parasitados foram tratados com Glucantime (p<0,05). A concentração de TNF-α foi menor nas células tratadas com CXCL10 + Glucantime do que naquelas tratadas somente com CXCL10 em ambos os tempos avaliados. Para IL-12 a assosciação CXCL10+Glucantime só induziu uma produção significante nas primeiras 24 h quando CXCL10 foi utilizado na concentração de 100ng/ml (p<0,01). As células tratadas com CXCL10 e associação CXCL10+Glucantime apresentaram uma redução da concentração de IL-4, diminuindo à medida que as concentrações da quimiocina foram maiores (p<0,01), enquanto o tratamento com Glucantime apresentou uma elevada produção desta citocina. Em ambos os tempos avaliados, o tratamento com CXCL10 induziu a produção de IL-10 nas concentrações de 50ng/mL e 100ng/mL, uma indução 3 vezes mais de IL-10 (p<0,001), quando comparado ao antimônio ou com a associação CXCL10+Glucantime. TGF-β mostrou comportamento diferente nos dois tempos avaliados, com aumento nas primeiras horas e queda nas últimas 48h. Glucantime induziu concentração de TGF-β superior àquela induzida por CXCL10. A associação CXCL10+ Glucantime apresentou produção elevada de TGF-β inversa à concentração de CXCL10 utilizada. Em conclusão, o tratamento in vitro com CXCL10 induziu um perfil de resposta Th1 (aumento de TNF-α e IL-12), com controle da parasitemia intracelular, e modulação da resposta inflamatória mediada por IL-10, em macrófagos infectados por L. braziliensis refratária ao antimônio. A associação Glucantime+CXCL10, embora tenha reduzido carga parasitária, não induzindo aumento significante de óxido nítrico, mostrando uma indução de TNF-α, IL-12 e reduzindo IL-4.
Abstract: Chemotherapy available for leishmaniasis is effective in many cases, however is still not satisfactory, presenting several inconveniences, one of them, resistance to antimony, which is a major current problems. Few studies using treatment with recombinant chemokines for leishmaniasis have been reported. The objective of this study was to evaluate the immunomodulatory effect in vitro of CXCL10 and its association with Glucantime for the infection of macrophages by Leishmania braziliensis strain refractory to treatment with antimony. For this, murine macrophages were infected with L. braziliensis and treated or not with CXCL10 (25, 50 e 100ng/mL), Glucantime (32mg/mL), and CXCL10+Glucantime [(25, 50 e 100ng/mL) + (32mg/mL)]. After 24 and 48h of infection were evaluated: parasitic load (macrophages infected count on coverslips stained), nitric oxide concentration (NO) and the pattern of the cytokines TNF-α, IL-12, IL-4, IL-10, and TGF-β in the culture supernatant. The results showed that the treatment with CXCL10 and CXCL10+Glucantime combination resulted in a significant reduction of the parasitic load, ranging from 70.5% to 95% and 92.4% and 95.0%, respectively, compared with the control untreated, while treatment with Glucantime decreased infection of macrophages to 74.0%. The reduction of the parasitic load was correlated with the increase of NO in all concentrations of CXCL10 (p <0.001). However, it was not observed the same dynamic when it was used to CXCL10+Glucantime association. TNF-α and IL-12 levels increased as a function of the concentration of CXCL10 in the first 24h, however, was inhibited when the infected macrophages were treated with Glucantime (p <0.05). The concentration of TNF-α was lower in cells treated with CXCL10+Glucantime than in those treated only with CXCL10 in both time periods. To the association CXCL10+Glucantime the IL-12 only induced a significant production within 24h when CXCL10 was used at a concentration of 100ng/ml (p <0.01). CXCL10 and association CXCL10+Glucantime treated cells showed a decrease of IL-4 concentration decreasing as the chemokine concentrations were higher (p <0.01) while treatment with Glucantime had a high production of this cytokine. In both times evaluated, treatment with CXCL10 induced IL-10 production at concentrations of 50ng/ml, and 100ng/ml, induced a 3-fold more IL-10 (p <0.001) when compared with antimony or with association CXCL10+Glucantime. TGF-β showed different behavior in the two time periods, an increase in the early hours, and fall in the past 48h. Glucantime induced TGF-β concentration higher than that induced by CXCL10. The association CXCL10+Glucantime showed increased production of TGF-β inverse of the concentration of CXCL10 used. In conclusion, in vitro treatment with CXCL10 induced a Th1 response profile (increase of TNF-α, and IL-12), controlling the intracellular parasitemia and modulation of the inflammatory response mediated by IL-10, in macrophages infected with L. braziliensis refractory to antimony. The Glucantime+CXCL10 association, although it has reduced parasitic load, not inducing a significant increase in nitric oxide, and showing a induction of TNF-α, IL-12 and reduction IL-4,.
URI: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/12684
metadata.dc.type: Dissertação
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